Выделение и идентификация культуры возбудителя. Культивирование. Для посева используют среду Хейфлик, Эдварда, ВИЭВ, унииэв, мартеновский бульон с 10-15% сыворотки крови крупного рогатого ско­та и 10%

Культивирование. Для посева используют среду Хейфлик, Эдварда, ВИЭВ, УНИИЭВ, мартеновский бульон с 10-15% сыворотки крови крупного рогатого ско­та и 10% дрожжевого экстракта.

Жидкий исследуемый материал, а также гомогенат легочной ткани вы­севают на агаровые и бульонные среды. Можно делать посев на поверх­ность агаровой среды кусочками легочной ткани и лимфатических узлов. Целесообразно из жидкого материала (легочная лимфа, плевральная жид­кость), тканевого гомогената (10%-ная взвесь в сердечно-мозговом бульо­не) готовить последовательные десятикратные разведения и по 0,1 мл раз­ведений 10^-1-10⁵ высевать на агаровую среду. Нередко из-за присутствия тканевых ингибиторов рост микоплазм получается в более высоких разве­дениях при отсутствии в малых. Посев материала в полужидкую среду Хей­флик с 0,15% агара увеличивает частоту выделения возбудителя. Посевы инкубируют при 37° С во влажной камере в аэробных условиях.

Рост возбудителя в жидких питательных средах обычно наблюдается через 3-7 суток в виде легкого помутнения, опалесценции, изменения цве­та. С целью выявления колоний микоплазм из пробирок с признаками роста производят высев на агаровые среды. Посевы на агаровых средах начина­ют ежедневно просматривать через 48 часов инкубирования в течение 5-7 суток, используя стереоскопический микроскоп с увеличением х25-40. Ко­лонии возбудителя имеют типичную для микоплазм форму «яичници-глазуньи» и диаметр 0,1-0,6 мм. На следующем этапе проводят идентификацию колоний микоплазм (или ахолеплазм), дифференцируя их от колоний классических бактерий или L-форм, используя методы, описанные выше, а также посев на среды без се­лективных факторов. Чистые культуры микоплазм отвивают на жидкую питательную среду и поддерживают путем субкультивирования с интерва­лом 7 суток.

Идентификация культуры возбудителя. Идентификацию обычно осуществляют серологическими методами: ок­раска колоний на агаре при помощи референтных флуоресцирующих ан­тисывороток, в тестах ингибиции роста и метаболизма — с диагностичес­кими сыворотками, а также исследуют ферментативную активность вы­деленных культур. Для
М. туcoides subsp. mycoides характерна чувстви­тельность к дигитонину, способность к ферментации глюкозы, редукции тетразолия натрия в аэробных и анаэробных условиях, разжижению сы воротки в аэробных условиях при слабой про геолитической активности в анаэробных условиях, инертность по отношению к аргинину и отсутствие фосфатазы (табл. 94).

Таблица 94 - Биохимические свойства видов и серогрупп микоплазм, выделяемых от крупного рогатого скота

н. д. — нет данных, d — 11—89% штаммов положительные.