Кровяной агар со спектомицином на основе перевара Хоттингера

К перевару Хоттингера добавляют 0,001% резазурина (индикатор ОКВП), 0,5% натрия хлорида, 0,25% глюкозы, 1% пептона, 2% агара, кипятят, пропуская через среду азот или углекислый газ в течение 10-15 минут, устанавливают рН 7,0-7,2, вносят 0,05% солянокислого цистеина, автоклавируют при 110°С в течение 30 минут, охлаждают до 42-45°С, пропуская при этом через среду обескислороженный газ, вносят 10% стерильной дефибринированной крови барана (КРС) и 400 мкг/мл спенто-мкцниа. Среду разливают по культуральным сосудам в атмосфере СО₂ (см. выше).

Среда RGCA-SC (Holdeman L.V. et al., 1977). Глюкоза — 0,0248 г, целлобиоза — 0,0248 г, растворимый крахмал — 0,05 г, (NH₄)₂S0₄ —
0,1 г, раствор резазурина (0,025%) — 0,4 мл, дистил­лированная вода — 20 мл, раствор солей — 50 мл, рубцовая жидкость (Randolph, Bidogicals, Houston, Тех) — 0,05 г, раствор гемина (2) — 1 мл, раствор витамина К — 0,02 мл.

Среду разливают по 10 мл в пробирки, содержащие 0,2 г агара, и авто-клавируют. На последнем этапе среду в двух пробирках расплавляют, ох­лаждают до 50° С и добавляют в каждую из них следующие компоненты: стерильную, инактивированную (60° С, 4 часа) сыворотку крови кроли­ка — 1,5 мл; раствор кокарбоксилазы (тиаминпирофосфата 0,025%), сте­рилизованный фильтрованием — 0,2 мл; стерильный, предварительно вос­становленный бульон PY — 2,0 мл. Компоненты перемешивают и содержи­мое обеих пробирок выливают в чашку Петри. Среду хранят в анаэростате либо используют немедленно.

Для поддержания серпулин в лабораторных условиях используют сре­ды без селективных добавок. Применяют для этой цели кровяной агар со спектиномицином на основе перевара Хоттингера, триптиказо-соевого агара. Например, кровяной агар Хоттингера готовят следующим об­разом: к перевару Хоттингера добавляют 0,001% резазурина (индика­тор ОКВП), 0,5% натрия хлорида, 0,25% глюкозы, 1% пептона, 2% ага­ра, кипятят, пропускают через среду азот или углекислый газ в течение 10-15 минут, устанавливают рН 7,0-7,2, вносят 0,05% цистеина гид­рохлорида; автоклавируют при 110°С в течение 30 минут, охлаждают до 40-45°С, пропуская при этом через среду обескислороженный газ, после чего вносят 10% дефибринированной стерильной крови барана (КРС) и 400 мкг/мл спектомицина. Среду разливают в атмосфере угле­кислого газа.