Идентификация возбудителя по ферментативным свойствам

При изучении ферментативных характеристик определяют способность культуры образовывать индол, каталазу, сероводород, уреазу, желатиназу, гемолизин, разлагать мясо, гидролизовать крахмал, эскулип, образовывать кис­лоту из сахаров и высокоатомных спиртов. При пересеве культур соблюдают требования относительно создания анаэробиоза, изложенные выше.

Для исследования указанных признаков используют обычные методы или коммерческие анаэробные идентификацион­ные системы API 20A, API-ZYM, ATB 32A, Minitec anaerobic II и др. Для B.nodosus характерна инертность в отношении углеводов и многоатомных спиртов, образование сероводорода, желатиназы, разложение мяса, отсут­ствие индола, гемолизина, уреазы, пигмента на агаре с лаковой кровью, отсутствие роста или очень слабый рост на питательных средах с 20% жел­чи крупного рогатого скота.

Серологическая идентификация B.nodosus. На стадии работы со смешанными и чистыми культурами B.nodosus иден­тификация возбудителя может быть проведена при помощи непрямого мето­да иммунофлуоресценции.

Биопроба. Проводят с целью обнаружения возбудителя в исследуемом материале. Ла­бораторные животные к B.nodosus не чувствительны. Биопробу ставят на здоровых овцах (ягнятах). Материал используют в нативном виде или раз­водят стерильным физиологическим раствором 1:5. В межпальцевой щели скальпелем делают 10-15 поверхностных линейных разрезов эпидермиса кожи и втирают исследуемый материал. Дополнительно в копытцевые щели помещают ватные тампоны, пропитанные материалом, и копытца на 2-3 дня забинтовывают. Заражение овец проводят в две конечности, животных содержат на влажной подстилке. Как положительный результат биопробы расценивают появление на 4-6-е сутки карманов в результате отторже­ния рогового и производящего слоев эпидермиса. Позднее отслаиваются внутренние боковые стенки копытец, и через 2-3 недели процесс распрос­траняется на подошву и наружные боковые стенки. По мере развития про­цесса из пораженных тканей готовят мазки и микроскопически подтверж­дают наличие B.nodosus.

В соответствии с действующей инструкцией «Лабораторная диагнос­тика копытной гнили овец и коз» лабораторный диагноз на копытную гниль в РФ устанавливают на основании результатов микроскопического ис­следования материала с подтверждением, в случае необходимости, в био­пробе.