Количественный анализ

В основе этого анализа лежит зависимость высоты пика h или его пло­щади S от количества вещества. Для узких пиков предпочтительнее изме­рение h, для широких размытых - S. Площадь пика измеряют разными способами: умножением высоты пика (h) на его ширину (а_1/2), измеренную на половине его высоты (рис 3.2.3); планиметрированием; с помощью ин­тегратора. Электрическими или электронными интеграторами снабжены современные хроматографы.

Для определения содержания веществ в пробе используют в основном три метода: метод абсолютной градуировки, метод внутренней нормализа­ции и метод внутреннего стандарта.

Метод абсолютной градуировки основан на предварительном опреде­лении зависимости между количеством введенного вещества и площадью или высотой пика на хроматограмме. В хроматограмму вводят известное количество градуировочной смеси и определяют площади или высота по­лученных пиков. Строят график зависимости площади или высоты пика от количества введенного вещества. Анализируют исследуемый образец, из­меряют площадь или высоту пика определяемого компонента и на основа­нии градировочного графика рассчитывают его количество.

Метод внутренней нормализации основан на приведении к 100% суммы площадей всех пиков на хроматограмме. Расчет массовой доли в % одного компонента проводят по формуле

K_AS_A

w_(a)% =________________, (3.1.2)

K_AS_a+K_bS_b+...K₂S_i

где К - поправочные коэффициенты, s_a, s_b, S_i - площади пиков компонен­тов смеси.

Этот метод дает информацию только об относительном содержании компонента в смеси, но не позволяет определить его абсолютную величи­ну.

Метод внутреннего стандарта основан на сравнении выбранного па­раметра пика анализируемого вещества с тем же параметром стандартного вещества, введенного в пробу в известном количестве. В исследуемую пробу вводят известное количество такого стандартного вещества, пик ко­торого достаточно хорошо отделяется от пиков компонентов исследуемой смеси (рис. 3.2.3). Проводят анализ пробы с внутренним стандартом и рас­считывают количество определяемого вещества по формуле

k_(a)h_(a)

g_(а)= ___________g_(BC) (3.1.3)

K_(BC)h_(BC)

где g_(A) - количество определяемого компонента А; h_(A) - высота пика ком­понента A; g _(BC) - количество внутреннего стандарта; h_(BC) - высота пика внутреннего стандарта; к _(A) и k_(BC) - поправочные коэффициенты.

В последних двух методах требуется введение поправочных коэффици­ентов, характеризующих чувствительность используемых детекторов к анализируемым веществам. Для разных типов детекторов и разных ве­ществ коэффициент чувствительности определяется экспериментально.

В жидкостной адсорбционной хроматографии используется также ана­лиз фракций растворов, собранных в момент выхода вещества из колонки. Анализ может быть проведен различными физико-химическими методами.

Жидкостную адсорбционную хроматографию применяют в первую очередь для разделения органических веществ. Этим методом весьма ус­пешно изучают состав нефти, углеводородов, эффективно разделяют - транс- и цис- изомеры, алкалоиды и др. С помощью ВЖХ можно опреде­лять красители, органические кислоты, аминокислоты, сахара, примеси пестицидов и гербицидов, лекарственных веществ и других загрязнителей в пищевых продуктах.