Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
II.1.1. Химические колориметрические методы
● Реакция Либермана-Бурхарда ( метод Илька ). Принцип метода: ХС, взаимодействуя с уксусным ангидридом, уксусной и концентрированной серной кислотами, дает изумрудно-зеленое окрашивание раствора; эфиры ХС при этом расщепляются, и окрашивание развивается, но реакция идет медленнее. Реакция ускоряется при повышении температуры, яркий свет разрушает окрашенные продукты. Нормальные величины: 3,0-5,2 ммоль/л. ● Реакция Калиани-Златкиса-Зака (метод Златкиса-Зака). Принцип метода: при взаимодействии ХС с хлорным железом, уксусной и серной кислотами образуется комплекс красного цвета. Эта реакция в 4-5 раз чувствительнее, чем метод Илька, но менее специфична, т.к. более широкий круг веществ, например, витамин А, дает такое же окрашивание.
Колориметрические методы подразделяются на прямые и непрямые. В прямых методах определения предварительно ХС не экстрагируется, а цветная реакция осуществляется непосредственно с сывороткой крови, а в непрямых методах липиды сыворотки крови вначале экстрагируются органическими растворителями, а после упаривания выполняют реакцию Либермана-Бурхарда.
Существенным недостатком химических методов определения концентрации холестерина является использование агрессивных, токсичных реактивов. В настоящее время эти методы не используются в КДЛ.
II.1.2. Ферментативные методы определения ХС являются наиболее специфичными, отличаются хорошей воспроизводимостью результатов, быстротой и простотой выполнения анализа. Большим их достоинством является то, что для проведения реакции необходим небольшой объем (часто 5 мкл) сыворотки крови и не требуются агрессивные жидкости. Принцип энзиматического метода определения концентрации общего ХС: при гидролизе эфиров ХС холестеролэстеразой образуется свободный холестерол, который окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества пероксида водорода; под действием пероксидазы пероксид водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта; интенсивность окраски пропорциональна концентрации ХС в пробе. Нормальные величины: идеальное содержание <5,2 ммоль/л, допустимое содержание 5,2-6,5 ммоль/л.
III. Методы определения липопротеинов и содержания ХС в различных фракциях липопротеинов
III.1. Определение липопротеинов сыворотки крови методом электрофореза в полиакриламидном геле. Принцип метода сводится к электрофоретическому разделению на фракции, предварительно окрашенных красителем суданом черным, липопротеинов сыворотки. Использование полиакриламидного геля позволяет сочетать разделение веществ по их электрофоретической подвижности с эффектом молекулярного сита. Метод обладает высокой разрешающей способностью. Метод электрофореза позволяет выявить относительное распределение фракций ЛП (т.е. их профиль), а также выявить аномальные ЛП. Примечание: возможно использование наборов «холестериновый профиль» и набор для фенотипирования липопротеинемий в системах электрофореза SAS (Helena Bio Sciences, Великобритания). Относительное содержание ЛП составляет: α-ЛП 22-46%, пре-β-ЛП 0-27%, β-ЛП 47-71%. В плазме крови здоровых людей, не принимавших пищи в течение 12-14 ч, хиломикроны практически отсутствуют.
III.2. Метод определения ХС липопротеинов высокой плотности (α-холестерина). Принцип метода: основан на способности ЛПНП и ЛПОНП в противоположность ЛПВП образовывать нерастворимые комплексы с гепарином в присутствии ионов марганца. После центрифугирования в надосадочной жидкости определяют содержание холестерина ЛПВП. Нормальные величины: 0,9-1,9 ммоль/л. Коэффициент (индекс) атерогенности (КА) рассчитывают по формуле:
КА = (ОХС – α-ХС) / α-ХС; где ОХС – общий холестерин, α-ХС – холестерин ЛПВП; КА в норме составляет 2-3
III.3. Метод определения содержания ЛОНП и ЛПНП по Бурштейну и Самаю. Принцип метода: в присутствии CaCl2 и гепарина нарушается коллоидная устойчивость белков сыворотки крови, в связи с чем осаждаются ЛПОНП и ЛПНП. Гепарин способен образовывать с β-липопротеинами комплекс, который под действием хлорида кальция выпадает в осадок. По степени помутнения раствора судят о концентрации ЛПОНП и ЛПНП. Норма: 35-55 усл.ед. или 3-4,5 г/л.
III.4. Расчетный способ определения ХС-ЛПНП – проводят по формуле Фридвальда (1972):
ХС-ЛПНП (ммоль/л) = ОХС– [(ХС-ЛПВП + триглицериды) / 2,2],
гдеОХС – общий холестерин.
Рекомендуемые (желательные) пределы для взрослых: 1,68-4,53 ммоль/л.
*Эта формула не применима у больных с тяжелой гипертриглицеридемией (>4,5 ммоль/л) и семейной дисбеталипопротеидемией.
III.5. Новые наборы для прямого определения ХС-ЛПВП и ХС-ЛПНП предложила фирма Плива-Лахема (Чехия). Определение ХС-ЛПВП основано на следующем принципе: антитела к β-ЛП человека, содержащиеся в реактиве 1, образуют иммунные комплексы со всеми ЛП, за исключением ХС-ЛПВП. Реактив 2 блокирует участие липопротеидов комплексов в ферментативных реакциях. В тоже время холестеринэстераза (ХЭ) и холестериноксидаза (ХО) из реактива 2 взаимодействуют только с ХС-ЛПВП, образующаяся перекись водорода меняет интенсивность окраски хромогена пропорционально количеству ХС-ЛПВП. Определение ХС-ЛПНП основано на следующем подходе: на первом этапе «протективный» реактив защищает избирательно ХС-ЛПНП от ферментативного окисления ферментами ХЭ и ХО. Происходит полное окисление холестерина фракций ЛПВП, ЛПОНП и хиломикронов. На втором этапе «протективный» реактив разрушается каталазой и сохраненный ХС-ЛПНП окисляется с образованием окрашенного продукта.
III.6. Количественное определение апопротеинов: апо В, апо А-I и ЛП(а).
Аполипопротеины – это белковые компоненты липопротеинов. Они участвуют в поддержании структурной целостности липопротеинов, узнавании липопротеинов рецепторами, а так же регуляции активности ферментов, действующих на липопротеины.
Аполипопротеин А1 (ApoA-1) является основным белковым компонентом антиатерогенных ЛПВП (липопротеинов высокой плотности). АПО А1 активирует лецитин-холестерин-ацилтрансферазу (ЛХАТ), которая катализирует этерификацию холестерина. Образующийся этерифицированный холестерин может затем транспортироваться в печень, где метаболизируется и выводится из организма. У пациентов с атеросклеротическими изменениями часто наблюдаются пониженные уровни АПО А1. Дажев случае, когда концентрация аполипопротеина В находится в пределах нормы, пониженные уровни АПО А1 в крови считаются фактором риска развития атеросклеротических процессов. Снижение уровня АПО А1
в крови наблюдается также при дислипопротеинемии, активной фазе цирроза печени, при лечении инсулином. Референтные пределы: для мужчин: 115 - 190 мг/дл, для женщин: 115 - 220 мг/дл
Аполипопротеин В (Apo B) - основной структурный белок атерогенных липопротеинов низкой плотности (ЛПНП). Аро В необходимы для осуществления связывания с рецепторами ЛПНП в печени и клеточных мембранах, и, таким образом, они участвуют в транспорте холестерина из печени к клеткам сосудов. Повышенный уровень Аро В часто наблюдается у пациентов с атеросклеротическими изменениями в сосудах и считается фактором риска развития атеросклероза. Референтные пределы: для мужчин 60 - 138 мг/дл, для женщин 52 - 129 мг/дл.
Определение в крови Apo A1 и Apo B имеет большое значение для выявления факторов риска атеросклероза коронарных артерий, а соотношение Apo B/Apo A1 превосходит прогностическое значение определения отдельных аполипопротеинов. Чем больше в сыворотке крови Apo A1 и меньше Apo B, тем ниже вероятность развития сердечно-сосудистой патологии. В связи с этим в лабораторной диагностике предложен коэффициент соотношения Apo B/Apo A1. В норме это соотношение не превышает «1» и служит одним из надежных показателей атерогенного сдвига. Показатель баланса атерогенных, Аполипопротеин В (Apo B) и антиатерогенных, Аполипопротеин А-1 (Apo A1) частиц - самый точный индикатор риска сердечнососудистых заболеваний у лиц с их бессимптомным течением и страдающих сахарным диабетом.
Для определения аполипопротеинов разработано большое количество методов, основанных на принципах иммунохимического анализа: иммунотурбидиметрия, иммунонефелометрия, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез, иммуноферментный анализ (ИФА), радиоиммунный анализ (РИА). В практике как зарубежных, так и отечественных КДЛ преимущественно используют методы иммунонефелометрии и иммунотурбидиметрии.
Липопротеин (а) или Lр(a) – липопротеин подобный ЛПНП, с сердцевиной, обогащенной холестеролом и молекулой аполипопротеина В-100, связанного дисульфидным мостиком с гликопротеином -аполипопротеином (а) или Aро(а), характерным только для этих частиц. Lp(a)-частицы варьируют по размерам от 200 до 700 - 800кД, и по структуре имеют сходство с плазминогеном. Повышение уровня Lp(a) в плазме является генетическим маркером риска атеросклеротического поражения организма. Референтные значения ЛП(а): целевой уровень ниже 14 мг/дл, пограничный риск – 14-30 мг/дл, высокий риск – 31-50 мг/дл и очень высокий риск более 50 мг/дл. Метод определения Lp(a) -иммунотурбидиметрический.
Показания к назначению анализ на липопротеины: 1) атеросклероз и связанные с ним заболевания сердечно-сосудистой системы: ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда (оценка риска, диагностика, прогнозирование); 2) болезни печени.
Интернет-ссылки:
http://www.astromed.biz/?uid=678 Маркеры риска и диагностики сердечнососудистых заболеваний: инфаркта миокарда, инсульта, атеросклероза и ишемической болезни сердца
http://www.analytica.ru/instructions/turbidimetry/HUMAN.pdf турбидиметрические методы исследования. Наборы реагентов
Date: 2015-05-22; view: 1389; Нарушение авторских прав; Помощь в написании работы --> СЮДА... |