Правила работы со световым микроскопом

Для того, чтобы ваша работа на занятии была продуктивной и для предупреждения разрушения изучаемых на занятиях гистологических препаратов и микроскопа необходимо соблюдать при микроскопии следующие основные правила:

1. Необходимо взять из шкафа хранения микроскоп и коробку с гистологическими препаратами с одним номером. Номер записать в альбом. На последующих занятиях вы будете пользоваться только этим комплектом.
2. Микроскоп устанавливается на левую от вас часть стола (в правой части располагается альбом).
3. Проверьте, в каком положении находится револьверное устройство микроскопа. Должен быть установлен объектив с малым увеличением (4х или 10х), который обычно используют для начала работы. При правильной установке в определенном положении объектива слышен щелчок и рукой ощущается фиксация револьверного устройства.
4. Проверьте расстояние от нижнего края объектива до предметного столика микроскопа - оно должно быть не менее 1 см.
5. Включите источник освещения и проверьте, виден ли в окуляре свет. При отсутствии освещенности поля зрения проверьте исправность источника света, настройку зеркала (если источник освещения внешний), открытие диафрагмы конденсора (если имеется), правильное положение объектива.
6. При правильном освещении поле зрения микроскопа должно быть равномерно освещено. Темная полоска в поле зрения – окулярная указка, предназначенная для обозначения структур в препарате студентом или преподавателем. Необходимо отрегулировать яркость поля зрения настолько, чтобы освещение воспринималось комфортным для глаза.
7. Установить гистологический препарат на предметный столик микроскопа. Перед установкой проверить – покровное стекло должно находиться на верхней поверхности предметного стекла. Расстояние от нижнего края объектива до стекла около 1 см, гистологический срез должен быть освещен и находиться непосредственно под объективом.
8. Проконтролировать, имеется ли изменение цвета в поле зрения окуляра. Если поле зрения остается светлым, необходимо перемещением препарата добиться его изменения до цвета исследуемого препарата.
9. Используя макровинт микроскопа (большая круглая ручка на станине) добиться появления изображения препарата в поле зрения микроскопа. Микровинтом (малая ручка на станине или круг в основании, площадке микроскопа) добиться максимально возможной резкости изображения микропрепарата.
10. Для увеличения изображения не касаясь препарата повернуть револьвер с объективом с большим увеличением (20х или 40х) к препарату до защелкивания фиксатора. Осторожно, чтобы не сломать препарат, подстроить резкость изображения микровинтом!!! При включенном большом увеличении извлекать гистологический препарат из-за возможности его поломки з апрещается!!!
11. После завершения микроскопии препарата на большом увеличении револьвер микроскопа переводится на объектив с малым увеличением до защелкивания фиксатора и препарат убирается со столика и помещается на свое место в коробке. Микроскоп готов к микроскопии следующего препарата.
12. После окончания работы микроскоп и коробка с препаратами убирается в шкаф для хранения. Проверяется: револьвер микроскопа включен на малое увеличение, на предметном столике не гистологического препарата, в коробке для хранения препаратов нет свободных мест.
13. Шкаф для хранения сдается дежурному группы и лаборанту кафедры.

Методические указания к изучению гистологических препаратов:

1. Рассмотрите в микроскоп сначала под малым, а потом под большим увеличением срез печени, окрашенный гематоксилином и эозином. Обратите внимание на окраску ядер и цитоплазмы печеночных клеток.

Ответьте на вопрос: в какой цвет и какой краской окрасились ядра и цитоплазма гепатоцитов печени?

1. Рассмотрите срез печени, окрашенный для выявления липидов Суданом черным и сафранином.

Ответьте на вопрос: в какой части клеток локализованы включения липидов и какова форма этих включений?

1. Рассмотрите срез печени, окрашенный для выявления гликогена кармином по Бесту и гематоксилином.

Ответьте на вопрос: в какой части клетки локализованы включения гликогена и в какой они окрасились цвет?

1. Рассмотрите срез печени, окрашенный для выявления РНК пиронином.

Ответьте на вопрос: в каких структурах клетки локализованы гранулы РНК, как они окрасились?

5,6 Рассмотрите под микроскопом 2 среза нервной ткани, обработанных разными способами:

а) срез мозжечка, импрегнированный азотнокислым серебром

б) нервные клетки сетчатки глаза, окрашенные метиленовой синью

Ответьте на вопрос: какова форма нервных клеток?

7. Рассмотрите срез костной ткани.

Ответьте на вопрос: какова форма костных клеток?

8 Рассмотрите срез аорты, окрашенный орсеином для выявления эластических волокон.

Ответьте на вопрос: каково направление эластичных волокон в стенке сосуда?

7. ВОПРОСЫ К ИТОГОВЫМ КОНТРОЛЯМ ПО ДАННОЙ ТЕМЕ:

7.1. ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К КУРСОВОМУ ЭКЗАМЕНУ

1. Виды микропрепаратов. Техника приготовления гистологических препаратов. Этапы приготовления. Врачебные этапы: взятие, маркировка и фиксация материала.

2. Техника приготовления гистологических препаратов. Этапы приготовления. Проводка материала и приготовление срезов. Виды микротомов. Окрашивание: цель, основные виды красителей. Заключение среза.

3. Морфометрические методы исследования. Задачи и возможности метода. Автоматизированные системы обработки изображений. Ядерно-цитоплазматическое отношение – как показатель функционального состояния клетки. (Лекционный материал).

4. Проточная цитометрия: основные принципы метода. Проточная ДНК-цитометрия. Задачи и возможности метода. Использование метода для изучения периодов митотического цикла в клетках различных тканей. (Лекционный материал).

5. Проточная цитометрия: основные принципы метода. Метод иммунофенотипирования. Задачи и возможности метода. Использование метода иммунофенотипирования и моноклональных антител для исследования клеточного звена иммунитета. (Лекционный материал).

6. Иммуногистохимический метод исследования. Основные принципы метода. Задачи и возможности метода. Применение иммуногистохимического метода для определения гистогенетического типа ткани. (Лекционный материал).

7.2. ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ:

1. Укажите правильное чередование основных этапов приготовления гистологических препаратов:

1) фиксация, промывка, обезвоживание, изготовление срезов, заливка в специальные среды, окрашивание срезов и заключение срезов;

2) обезвоживание, фиксация, промывка, заливка в специальные среды, изготовление срезов, окрашивание срезов и заключение срезов;

3) фиксация, обезвоживание, заливка в специальные среды, промывка изготовление срезов, окрашивание срезов и заключение срезов;

4) фиксация, промывка, обезвоживание, заливка в специальные среды, изготовление срезов, окрашивание срезов и заключение срезов;

5) фиксация, обезвоживание, промывка, изготовление срезов, окрашивание срезов, заливка в специальные среды и заключение срезов.

2. На каком этапе приготовления гистологических препаратов сохраняется прижизненная структура ткани путём быстрой коагуляции её белков:

1) обезвоживание;

2) заливка в специальные среды;

3) фиксация;

4) изготовление срезов;

5) окрашивание и заключение срезов

3. На каком этапе приготовления гистологических препаратов придается контрастность структурам ткани:

1) фиксация;

2) обезвоживание;

3) заливка в специальные среды;

4) изготовление срезов;

5) окрашивание и заключение срезов.

4. На каком этапе приготовления гистологических препаратов придается плотность и однородность взятому материалу:

1) фиксация;

2) обезвоживание;

3) заливка в специальные среды;

4) изготовление срезов;

5) окрашивание и заключение срезов.

5. На каком этапе приготовления гистологических препаратов достигается определённая толщина взятого материала:

1) фиксация;

2) обезвоживание;

3) заливка в специальные среды;

4) изготовление срезов;

5) окрашивание и заключение срезов.

6. Методы окрашивания гистологических препаратов основаны на:

1) различной кислотности (рН) ядра и цитоплазмы;

2) осаждении металлов из солевых растворов на плотных структурах клетки;

3) химическом взаимодействии красящих реактивов с определёнными компонентами клетки;

4) прижизненном окрашивании клеток и тканей;

5) всё вышеперечисленное.

7. Избирательная окраска ядра и цитоплазмы основана на:

1) разнице рН структур клетки;

2) осаждении металлов из солевых растворов;

3) химическом взаимодействии красящих реактивов с определёнными компонентами клетки;

4) прижизненном окрашивании;

5) всё вышеперечисленное.

8. Импрегнация основана на:

1) разнице рН структур клетки;

2) осаждении металлов из солевых растворов;

3) химическом взаимодействии красящих реактивов с определёнными компонентами клетки;

4) прижизненном окрашивании;

5) всё вышеперечисленное.

9. Выявление химического состава клеток и тканей основано на:

1) разнице рН структур клетки;

2) осаждении металлов из солевых растворов;

3) химическом взаимодействии красящих реактивов с определёнными компонентами клетки;

4) прижизненном окрашивании;

5) всё вышеперечисленное.

10. Метод изучения гистологических препаратов, основанный на различном преломлении света в зависимости от плотности структур:

1) темного поля;

2) фазового контраста;

3) радиоавтографии;

4) цитофотометрии;

5) морфометрии.

11. Метод изучения гистологических препаратов, основанный на использовании бокового освещения, при котором видно светлое изображение прозрачных объектов благодаря отражению ими световых лучей:

1) темного поля;

2) фазового контраста;

3) радиоавтографии;

4) цитофотометрии;

5) морфометрии.

12. Метод изучения гистологических препаратов, позволяющий дать количественную оценку содержания веществ, входящих в состав клетки:

1) темного поля;

2) фазового контраста;

3) радиоавтографии;

4) цитофотометрии;

5) морфометрии.

13. Метод изучения гистологических препаратов, основанный на подсчёте числа клеток их размеров, формы, а также их структур:

1) темного поля;

2) фазового контраста;

3) радиоавтографии;

4) цитофотометрии;

5) морфометрии.

14. Механическая часть микроскопа:

1) основание штатива;

2) тубусодержатель;

3)тубус;

4) коробка микромеханизма;

5)всё вышеперечисленное.

15. Механическая часть микроскопа:

1) макрометричесикй винт (кремальера);

2) тубусодержатель;

3)тубус;

4) микрометрический винт;

5)всё вышеперечисленное.

16. Механическая часть микроскопа:

1) основание штатива;

2) револьверное устройство;

3)тубус;

4) коробка микромеханизма;

5)всё вышеперечисленное.

17. Механическая часть микроскопа:

1) основание штатива;

2) тубусодержатель;

3)тубус;

4) предметный столик;

5)всё вышеперечисленное.

18. К оптической части микроскопа относится:

1) конденсор;

2) диафрагма;

3) окуляр;

4) зеркало;

5) револьверное устройство.

19. К оптической части микроскопа относится:

1) конденсор;

2) диафрагма;

3) зеркало;

4) объектив;

5) револьверное устройство.

20. Осветительное устройство микроскопа включает:

1) окуляр;

2) диафрагма;

3) коробку микромеханизма;

4) объектив;

5) револьверное устройство.

21. Осветительное устройство микроскопа включает:

1) окуляр;

2) объектив;

3) коробку микромеханизма;

4) конденсор;

5) револьверное устройство.

22. Осветительное устройство микроскопа включает:

1) окуляр;

2) коробку микромеханизма;

3) зеркало;

4) объектив;

5) револьверное устройство.

ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ НА ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ

8. ЛИТЕРАТУРА ДЛЯ ПОДГОТОВКИ ТЕМЫ:

8.1. Основная:

8.1.1. С.Л.Кузнецов и Н.Н.Мушкамбаров Гистология, цитология и

эмбриология: Учебник для студентов медицинских Вузов МИА,

Москва, 2005.

8.1.2. Лабораторные занятия по курсу гистологии, цитологии и

эмбриологии / Под ред.Ю.А.Афанасьева, А.Н.Яыцковского. –

М.:Высшая школа,1999

8.1.3. Гистология. Комплексные тесты: ответы и пояснения. / Под ред.

С.Л.Кузнецова, Ю.А. Челышева. – М.: Геотар. 2001.

8.1.4. Атлас по гистологии, эмбриологии и цитологии / Кузнецов С.Л. с

соавт. – М., 2001.

8.2. Дополнительная:

8.2.1. Гистология: Учебник / Под редакцией Э.Г.Улумбекова,

Ю.А.Челышева. – М.: Геотар, 2001.

8.2.2. Быков В.Л. Частная гистология человека. СПб, 2000.

8.2.3. Эмбриональное развитие человека / Под ред. В.В.Гемонова – М.,

1999.

8.2.4. Гистология. Ведение в патологию:Учебник / Под редакцией

Э.Г.Улумбекова, Ю.А.Челышева. – М.: Геотар, 1997.

8.2.5. Гистологическая техника:Учебное пособие / Под редакцией

В.В.Семченко, С.А.Барашкова, В.Н. Ноздрина, В.Н.Артемьева. –

Омск-Орёл: Омская областная типография, 2006.