Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
Перечень практических навыков по микробиологии (станции) для проведения второго этапа итогового контроля в виде ОСПЭ
Кафедра микробиологии, вирусологии им. Ш.И. Сарбасовой
| 1. Приготовление нефиксированного мазка |
| 2. Приготовление фиксированного мазка |
| 3. Окраска по граму |
| 4. Окраска капсул по Бурри-Гинс |
| 5. Окраска мазка по Ожешко |
| 6. Окраска по методу Циля Нильсена |
| 7. Микроскопическое исследование |
| 8. Выделение чистой культуры по способу Дригальского |
| 9. Выделение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху) |
| 10. Выделение чистой культуры анаэробов (метод Фортнера) |
| 11. Выделение чистой культуры аэробов (1 - 2 день исследования) |
| 12. Выделение чистой культуры аэробов (3 - 4 день исследования) |
| 13. Выделение чистой культуры анаэробов (1-2 день исследования) |
| 14. Выделение чистой культуры анаэробов (3-4-й день исследования) |
| 15. Определение чувствительности к антибиотикам диско-диффузионным методом |
| 16. Ориентировочная агглютинация на стекле |
| 17. Развернутая реакция агглютинации при бруцеллезе (реакция Райта) |
| 18. Реакция связывания комплемента (РСК) – реакция Вассермана |
| 19. Реакция иммунофлюоресценции (риф) при диагностике хламидийной инфекции |
| 20. РПГА при определении HBs антигена вируса гепатита В |
| 21. ИФА определение антител против Вич |
| 22. Постановка аллергической пробы в диагностике туберкулеза |
| 23. Забор проб испражнений для исследования на патогенную флору |
| 24. Забор проб испражнений для исследования на дисбактериоз |
| 25. Забор отделяемого открытых инфицированных ран для микробиологических исследований |
| 26. Забор мочи для микробиологических исследований |
| 27. Посев крови на стерильность |
Станция 1 «ПРИГОТОВЛЕНИЕ НЕФИКСИРОВАННОГО МАЗКА»
| Шаг 1 Взять обезжиренное предметное стекло. Ограничить зону мазка, нарисовав стеклографом кружок |
| Шаг 2 Стерильной пастеровской пипеткой нанести 1 каплю стерильного физиологического раствора на предметное стекло |
| Шаг 3 Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки |
| Шаг 4 Остуженной стерильной бактериальной петлей произвести отбор исследуемой колонии |
| Шаг 5 Внести отобранную колонию в физ.раствор, хорошо перемешать |
| Шаг 6 Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки и поставить в штатив |
| Шаг 7 Подсушить препарат в потоке теплого воздуха над пламенем горелки. |
| Шаг 8 Нанести на мазок 1 каплю иммерсионного масла. |
Станция 2 «ПРИГОТОВЛЕНИЕ ФИКСИРОВАННОГО МАЗКА»
| Шаг 1 На поверхности обезжиренного стекла карандашом нарисовать кружочек |
| Шаг 2 В кружок пипеткой внести 1 каплю физиологического раствора |
| Шаг 3 Бактериологическую петлю простерилизовать над пламенем горелки, остудить, взять с поверхности агара культуру, внести в каплю физиологического раствора, размешать круговыми движениями. |
| Шаг 4 Бактериологическую петлю простерилизовать, поставить в штатив. |
| Шаг 5 Пинцетом взять предметное стекло и просушить в теплой струе воздуха высоко над пламенем горелки. |
| Шаг 6 Препарат зафиксировать, опуская в пламя горелки на 1 сек. 3 раза |
| Шаг 7 Нанести на мазок 1 каплю иммерсионного масла, микроскопировать |
Станция 3 «Окраска по Граму»
| Шаг 1 На мазок, фиксированный над пламенем горелки, кладут фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом и наносят несколько капель воды. Прокрашивание 1-2 минуты. |
| Шаг 2 Снимают бумагу, сливают остаток красителя и, не промывая препарат водой, наливают раствор Люголя на 1-2 мин до почернения препарата. |
| Шаг 3 Раствор Люголя сливают. Для обесцвечивания на мазок капают несколько капель этилового спирта, 30 секунд -1 мин. |
| Шаг 4 Препарат тщательно промывают водопроводной водой. |
| Шаг 5 Препарат докрашивают водно-спиртовым раствором фуксина в течение 2 минут. |
| Шаг 6 Препарат тщательно промывают водопроводной водой, промокая фильтровальной бумагой. |
| Шаг 7 Микроскопия. На высушенный окрашенный мазок-препарат наносят каплю иммерсионного масла и смотрят под увеличением объектива 90-100. |
| Шаг 8 Результаты окраски. Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные бактерии - в ярко-малиновый цвет. |
Станция 4 «Окраска капсул по Бурри-Гинс»
| Шаг 1 На обезжиренное предметное стекло наносят каплю туши |
| Шаг 2 Простерилизовать бактериальную петлю |
| Шаг 3 Стерильной бактериальной петлей произвести отбор исследуемой колонии |
| Шаг 4 Внести отобранную колонию в каплю туши, гомогенизировать |
| Шаг 5 Препарат высушивают на воздухе и фиксируют метиловым спиртом или смесью Никифорова. |
| Шаг 6 Промывают водой |
| Шаг 7 Окрашивают карболовым фуксином Циля, 3-5 мин |
| Шаг 8 Промывают водой, высушивают при комнатной температуре |
| Шаг 9 Микроскопия с иммерсионной системой |
| Шаг 10 Результаты окраски. Фон препарата темный, микробные тела окрашиваются в красный цвет, а окруженная ее капсула не окрашиваются тушью, остаются бесцветными |
Станция 5 «ОКРАСКА МАЗКА ПО ОЖЕШКО»
| Шаг 1 На нефиксированный мазок наносят 0,5 % р-р HCI и подогревают над племенем горелки в течение 1-2 мин, после чего остатки кислоты сливают | |
| Шаг 2 Промывают водой, подсушивают и фиксируют над пламенем горелки. | |
| Шаг 3 Препарат покрывают фильтровальной бумагой и наносят карболовый фуксин Циля. Удерживая стекло пинцетом, препарат подогревают над пламенем горелки до отхождения паров. Добавляют новую порцию красителя и подогревают еще paз. | |
| Шаг 4 После охлаждения снимают бумагу и промывают препарат водой. | |
| Шаг 5 Препарат обесцвечивают 5% р-ом серной кислоты, наливая кислоту на стекло. | |
| Шаг 6 Препарат несколько раз промывают водой. | |
| Шаг 7 Окрашивают водно-спиртовом раствором метиленового-синего в течение 3-5мин. | |
| Шаг 8 Препарат промывают водой и высушивают, промокая фильтровальной бумагой. | |
| Шаг 9 Нанести на мазок 1 каплю иммерсионного масла. | |
| Шаг 10 Результат: Споры принимают ярко-красный цвет фуксина. Вегетативное тело бактерии, обесцвеченной серной кислотой, окрашивается дополнительной краской в синий цвет. |
Станция 6 «окраска по методу Циля Нильсена»
| Шаг 1 На фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают карболовый фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в пламени до появления паров. |
| Шаг 2 Препарат промывают дистиллированной водой, бумагу сбрасывают пинцетом в ванночку для отходов. |
| Шаг 3 Вносят пипеткой несколько капель на поверхность мазка 5% раствора серной кислоты на 2-4 сек. |
| Шаг 4 Промывают дистиллированной водой |
| Шаг 5 Вносят пипеткой несколько капель синьки Леффлера. Время окраски 3-5 минут |
| Шаг 6 Промывают дистиллированной водой, высушивают фильтровальной бумагой. |
| Шаг 7 Нанести 1 каплю иммерсионного масла, микроскопировть. Учет результатов: на голубом фоне будут видны палочковидной формы бактерии красного цвета |
Станция 7 «МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ»
| Шаг 1 на приготовленный и окрашенный мазок на предметном стекле нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами; |
| Шаг 2 повернуть револьвер до отметки иммерсионного объектива Х100; |
| Шаг 3 осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла; |
| Шаг 4 установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта; |
| Шаг 5 провести окончательную фокусировку препарата микроскопическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота. |
Станция 8 «Выделение чистой культуры по способу Дригальского»
| Шаг 1 Взять три чашки Петри с питательной средой, промаркировать 1,2,3. |
| Шаг 2 Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки. |
| Шаг 3 Стерильной бактериальной петлей взять каплю исследуемого материала. |
| Шаг 4 В первую чашку Петри вносят каплю материала и стерильным шпателем втирают его в поверхность питательной среды. |
| Шаг 5 Не прожигая шпателя и не набирая нового материала, шпатель переносят во 2-ю чашку Петри и втирают в поверхность питательной среды. |
| Шаг 6 Не прожигая шпателя и не набирая нового материала, шпатель переносят в 3-ю чашку Петри и втирают в поверхность питательной среды. |
| Шаг 7 Инкубация в термостате при 370С в течение 18-24 часов. |
| Шаг 8 Результат. Большее количество колоний вырастает в 1-2-й чашках, изолированные колонии – в 3-ей чашке. |
Станция 9 «Выделение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху)»
| Шаг 1 Взять три пробирки с 15 мл расплавленным мясо-пептонным агаром, 3 стерильные чашки Петри, промаркировать 1,2,3. |
| Шаг 2 Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки. |
| Шаг 3 Стерильной бактериальной петлей взять каплю исследуемого материала. |
| Шаг 4 В первую пробирку вносят каплю материала и вращают несколько раз, зажав между ладонями. |
| Шаг 5 Прокаленной и остуженной бактериальной петлей содержимого 1-й пробирки переносят во 2-ю пробирку, гомогенизируют вращательными движениями. |
| Шаг 6 Прокаленной и остуженной бактериальной петлей содержимого 2-й пробирки переносят в 3-ю пробирку, гомогенизируют вращательными движениями. |
| Шаг 7 Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в пронумерованные стерильные чашки Петри, соответствующим номерам пробирок. |
| Шаг 8 Инкубация в термостате при 370С в течение 18-24 часов. |
| Шаг 9 Результат. Большее количество колоний вырастает в 1-2-й чашках, изолированные колонии – в 3-ей чашке. |
Станция 10 «Последовательность этапов выделения чистой культуры анаэробов (метод Фортнера)»
| Шаг 1 Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки. |
| Шаг 2 Бактериальной петлей разделить среду на две половинки по середине кровяного сахарного агара |
| Шаг 3 Стерильной бактериальной петлей взять культуру анаэробов из среды Китта-Тароцци или каплю исследуемого материала и засевают одну половину агара. |
| Шаг 4 Простерилизовать бактериальную петлю, взять культуру аэробов, например кишечной палочкой (Escherichia coli) и засеять другую половину питательного агара. |
| Шаг 5 Засеянные чашки Петри закрывают, инкубируют в анаэробных условиях: в СО2 инкубаторе, в эксикаторе или анаэростате при температуре 370С на 24-48 часов. |
| Шаг 6 Второй день. Просматривают посевы, выделяют подозрительные колонии в зоне роста анаэробных бактерий. |
| Шаг 7 Мазки окрасить по Граму, промикроскопировать |
| Шаг 8 Результат. Под микроскопом в мазках видны крупные споровые грамположительные палочки |
Станция 11 «ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АЭРОБОВ (1 - 2 ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ)»
| Шаг 1 Первый день: Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки, остудить, внести в пробирку с исследуемым материалом, прикоснутся кончиком петли к материалу | |
| Шаг 2 левой рукой приоткрывают один край чашки, вводят петлю внутрь | |
| Шаг 3 у противоположного края делают петлей несколько штрихов в одном месте | |
| Шаг 4 петлю отрывают и засевают материал параллельными штрихами от одного края чашки к другому с интервалом 5-6 мм. | |
| Шаг 5 Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки и поставить в штатив. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 18-24 часов. | |
| Шаг 6 Второй день: Изучение культуральных признаков: описать выросшие колонии | |
| Шаг 7 Изучение морфологических признаков: Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки, остудить и из ½ колонии приготовить фиксированный мазок, окрасить по Граму, микроскопировать, определить форму микроорганизма и расположение бактерий, тинкториальные признаки. | |
| Шаг 8 Выделение чистой культуры – Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки, остудить, оставшуюся ½ колонии пересеять на скошенный агар. | |
| Шаг 9 Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки и поставить в штатив | |
| Шаг 10 Посевы инкубируют в термостате при 37С 18 – 24ч. |
Станция 12 «ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АЭРОБОВ (3 - 4 ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ)»
| Шаг 1 Третий день: Изучение чистоты выделенной на скошенном агаре культуры: приготовить фиксированный мазок, окрасить по Граму, микроскопировать, определить форму и расположение микроорганизмов, тинкториальные свойства. | |
| Шаг 2 Изучение биохимических признаков: выбрать тесты для идентификации, произвести постановку этих тестов. | |
| Шаг 3 Постановка теста на чувствительность выделенной культуры к антибиотикам | |
| Шаг 4 Четвертый день: Идентификация выделенной культуры: учет результатов тестов. | |
| Шаг 5 Учет результатов определения чувствительности выделенной культуры к антибиотикам | |
| Шаг 6 Заполнение и выдача результата бактериологического исследования и антибиотикограммы. |
Станция 13 «Выделение чистой культуры анаэробов (1-2 день исследования)»
| Шаг 1 Пробирку со средой Китта-Тароцци прогреть на кипящей водяной бане в течение 10-20 мин, охладить до 30-370С. |
| Шаг 2 Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки. |
| Шаг 3 Стерильной бактериальной петлей взять каплю исследуемого материала. |
| Шаг 4 Засевают в пробирку со средой Китта-Тароцци. |
| Шаг 5 Инкубация в анаэробных условиях: в СО2 инкубаторе, в эксикаторе или анаэростате при температуре 370С на 24-48 часов. |
| Шаг 6 Второй день. Просматривают посевы, при помутнении среды с придонным ростом бактерий и газообразовании приготовить мазки. |
| Шаг 7 Мазки окрасить по Граму, микроскопия |
| Шаг 8 Результат микроскопии. Под микроскопом в мазках видны крупные споровые грамположительные палочки |
| Шаг 9 Пересев материала с Китта-Тароцци на кровяной сахарный агар и в столбик сахарного питательного агара в пробирке, железосульфитный агар (среда Вильсон-Блера). |
| Шаг 10 Посевы инкубируют в анаэробных условиях: в СО2 инкубаторе, в эксикаторе или анаэростате при 370С в течение 48-72 часов. |
Станция 14 «Выделение чистой культуры анаэробов (3-4-й день исследования)»
| Шаг 1 Просмотр выросших колоний на кровяном сахарном агаре, высоком столбике сахарного агара в пробирке и Вильсон-Блера среде после инкубации. |
| Шаг 2 Пересев типичных колоний на среду Китта-Тароцци или тиогликолевую среду (получение чистой культуры). |
| Шаг 3 Инкубация в строго анаэробных условиях в термостате при 370С в течение 24-48 часов. |
| Шаг 4 После инкубации идентификация чистой культуры по биохимическим признакам традиционными методами или с помощью тест-систем для определения специфических бактериальных ферментов или метаболитов. |
| Шаг 5 Определение продукции факторов вирулентности: серологическая идентификация экзотоксинов в реакции нейтрализации |
| Шаг 6 Определение чувствительности к антибиотикам в строго анаэробных условиях. |
| Шаг 7 Окончательный результат. |
Станция 15 «Определение чувствительности к антибиотикам диско-диффузионным методом»
| Шаг 1 Градуированной пипеткой внести на поверхность питательной среды взвесь микроорганизмов в объеме 0,5 мл. Использованную пипетку поместить в дезинфицирующий раствор |
| Шаг 2 Стерильным бактериологическим шпателем распределить по поверхности агара. Использованный шпатель поместить в дезинфицирующий раствор |
| Шаг3 Приоткрытые чашки подсушить в течение 10 мин. |
| Шаг 4 Стерильным пинцетом внести диски с антибиотиками, не более 6 дисков на чашку диаметром 100 мм. Расстояние между дисками 20 мм |
| Шаг 5 Инкубация в термостате при 37ºС в течение 18-24 часа |
| Шаг 6 Учет результатов. При положительном результате вокруг диска с антибиотиком будет зона задержки роста микроорганизмов. При отрицательном результате вокруг дисков зона задержки роста микроорганизмов не будет |
Станция 16 «Ориентировочная агглютинация на стекле»
| Шаг 1 На поверхности обезжиренного стекла карандашом на расстоянии друг от друга нарисовать 3 кружочка |
| Шаг 2 В 1-ый и 2-ой кружок внести по 1 капле диагностической агглютинирующей сыворотки стерильной пипеткой. В 3-ий кружок внести 1 каплю физиологического раствора |
| Шаг 3 Бактериологическую петлю простерилизовать над пламенем горелки, остудить, взять с поверхности агара культуру, внести в 1-ую каплю, размешать круговыми движениями. |
| Шаг 4 Бактериологическую петлю простерилизовать над пламенем горелки, остудить, взять с поверхности агара культуру, внести в 3-ю каплю с физиологическим, размешать круговыми движениями. |
| Шаг 5 Бактериологическую петлю простерилизовать, поставить в штатив. |
| Шаг 6 Инкубация при комнатной температуре 2-5 мин. Учет результатов. При положительном результате в 1-ой капле будет видны хлопья агглютината, вторая капля (отрицательный контроль) прозрачная, 3 3-ей капле (контроль антигена) равномерная муть. |
Станция 17 «Развернутая реакция агглютинации при бруцеллезе (Реакция Райта)»
| Шаг 1 В стерильную пробирку внести 2,4 мл 0,9% р-ра натрия хлорида, добавить 0,1 мл исследуемой сыворотки (рабочее разведение сыворотки). Инактивировать на водяной бане при температуре 560С в течение 30 мин; |
| Шаг 2 закапать в пробирку 4 капли 50% формалинизированных эритроцитов и поставить в термостат на 30 минут или при комнатной температуре на 1 час, или на ночь в холодильник. |
| Шаг 3 Центрифугировать при 2000 об/мин в течение 15 минут. |
| Шаг 4 Установить в штатив 7 пустых пробирок (5 из них опытные, остальные контрольные: КС - контроль сыворотки, КД - контроль диагностикума). Подписать на пробирках номер и разведение сыворотки. |
| Шаг 5 Внести, начиная со 2-й пробирки, во все по 0,5 мл 0,9% раствора хлорида натрия. |
| Шаг 6 Внести в 1-ю, 2-ю и в контроль сыворотки по 0,5 мл рабочего разведения сыворотки. |
| Шаг 7 Исследуемую сыворотку титровать, перенести по 0,5 мл из пробирки в пробирку, из 5-ой пробирки 0,5мл выливают в дез. раствор Таким образом получают ряд двухкратных разведений сыворотки: 1:100, 1:200, 1:400, 1:800. |
| Шаг 8 Затем во все пробирки, кроме КС, добавить по 0,5 мл диагностикума бруцеллезного. |
| Шаг 9 Приготовить рабочее разведение диагностикума: развести до рабочего титра 1:10 (0,4 мл концентрированного диагностикума + 3,6 мл 0,9% р-ра натрия хлорида)- контроль диагностикума. |
| Шаг 10 Тщательно встряхнуть пробирки, поставить в термостат при 370С на 24 часа. |
| Шаг 11 Произвести учет результатов реакции: положительный результат реакции агглютинации характеризуется образованием на дне пробирки крупно-хлопчатого осадка с прозрачной надосадочной жидкостью. |
Станция 18 «Реакция связывания комплемента (РСК) – реакция Вассермана»
| Шаг 1 Подготовить ингредиенты реакции: антиген 1 – неспецифический антиген (липиды из мышцы сердца быка), 2 и 3 – специфические антигены трепонемы, инактивированная исследуемая сыворотка, изотонический раствор хлорида натрия, комплемент в рабочей дозе, гемолитическая система и пронумеровать 4 пробирок (1-я, 2-я, 3-я, 4-я (контроль)). |
| Шаг 2 Внесение исследуемой сыворотки во все пробирки по 0,1 мл. |
| Шаг 3 Внесение изотонического раствора натрия хлорида по 0,4 мл в 1-, 2- и 3-ю пробирки и по 0,9 мл в 4-ю пробирку. |
| Шаг 4 Внесение 0,5 мл неспецифического антигена 1 в 1-ю пробирку |
| Шаг 5 Внесение 0,5 мл специфического антигена 2 во 2-ю пробирку |
| Шаг 6 Внесение 0,5 мл специфического антигена 3 во 3-ю пробирку |
| Шаг 7 Внесение комплемента по 0,5 мл во все пробирки, гомогенизировать. |
| Шаг 8 Инкубация в термостате при 370С в течение 45 мин. |
| Шаг 9 Добавление гемолитической системы по 1,0 мл во все пробирки. Встряхивают и выдерживают 40-60 мин при 370С в термостате |
| Шаг 10 Учет результатов. В первых трех пробирках «положительная реакция» +++ - полная задержка гемолиза (жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дно. «отрицательная реакция» «-» - гемолиз (полный лизис эритроцитов, жидкость окрашена (лаковая кровь)). |
Станция 19 «Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) при диагностике хламидийной инфекции»
| Шаг 1 На поверхности обезжиренного стекла карандашом нарисовать кружок диметром 15-20 мм |
| Шаг 2 В центр кружочка вносят материал больного петлей круговыми движениями.Бактериологическую петлю простерилизовать, поставить в штатив. |
| Шаг 3 Мазок подсушивают над пламенем горелкив теплой струе воздуха до полного высыхания |
| Шаг 4 На подсушенный мазок вносят 2-3 капли диагностической сыворотки против хламидий |
| Шаг 5 Инкубация в влажной камере в термостате при 37˚С 30 мин |
| Шаг 6 Промывают препарат промывочным раствором |
| Шаг 7 На мазок вносят 2-3 капли антивидовой флюоресцирующей сыворотки |
| Шаг 8 Инкубация в термостате при 37˚С 30 мин |
| Шаг 9 Промывают препарат промывочным раствором |
| Шаг 10 Вносят 1 каплю иммерсионного масла, микроскопируют. Учет результатов: при положительном результате в мазке будет обнаруживаться зеленовато желтое свечение на темном фоне. При отрицательной реакции все поля зрения при микроскопии будут темными без свечения. |
Станция 20 «РПГА при определении HBs антигена вируса гепатита В»
| Шаг 1 Приготовить рабочее разведение исследуемой сыворотки 1:5: в стерильную пробирку градуированной пипеткой внести 1 мл исследуемой сыворотки и 4 мл стерильного физиологического раствора, перемешать пипетированием |
| Шаг 2 В 6 лунок внести физиологический раствор 1 мл и отдельно в 2 лунки для контролей |
| Шаг 3 Градуированной пипеткой набрать 1 мл из разведения 1:5 и внести в 1-ую лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:10 |
| Шаг 4 Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл смеси из 1-ой лунки и внести во 2-ую лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:20. |
| Шаг5 Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл смеси из 2-ой лунки и внести во 3-ю лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:40. |
| Шаг 6 Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл смеси из 3-ей лунки и внести во 4-ю лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:80. |
| Шаг 7 Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл смеси из 4-ой лунки и внести во 5-ю лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:160. |
| Шаг 8 Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл смеси из 5-ой лунки и внести во 6-ую лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:320. |
| Шаг9 Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл рабочего разведения сыворотки 1:5 внести в 1-ую контрольную лунку перемешать пипетированием |
| Шаг10 Взять новую градуированную пипетку, внести в каждую лунку по 0,5 мл взвеси эритроцитарного антительного HBs-диагностикума, кроме контрольных. |
| Шаг 11 Взять новую градуированную пипетку, набрать 0,5 мл взвеси эритроцитарного антительного HBs-диагностикума внести в 2-ую контрольную лунку перемешать пипетированием с физиологическим раствором |
| Шаг 12 Инкубирование в термостате при 37˚С 60 мин. |
| Шаг 13 Учет результатов: при положительной реакции на дне лунок образуется мелкозернистый осадок по всей поверхности в виде «зонтика». При отрицательном результате осадок с ровными краями, в виде «пуговки» |
Станция 21 «ИФА - определение антител против ВИЧ»
| Шаг 1 В три лунки микропланшета внести исследуемую сыворотку |
| Шаг 2 В следующий ряд в три лунки внести сыворотку с антителами к ВИЧ (положительный контроль) |
| Шаг3 В следующий ряд в три лунки внести сыворотку без антител к ВИЧ (отрицательный контроль) |
| Шаг 4 Инкубация в термостате при 37ºС в течение 1 часа |
| Шаг 5 Промыть все лунки промывочным раствором 5 раз |
| Шаг 6 Внести во все лунки антиглобулиновую сыворотку меченную ферментом пероксидазой (конъюгат) |
| Шаг 7 Инкубация в термостате при 37ºС в течение 1 часа |
| Шаг 8 Промыть все лунки промывочным раствором 5 раз |
| Шаг 9 Внести во все лунки субстрат для фермента пероксидазы - хромоген |
| Шаг 10 Инкубация в термостате при 37ºС в течение 30минут |
| Шаг 11 Внести во все лунки стоп реагент |
| Шаг 12 Анализ оптической плотности раствора в микропланшетев считывающих аппаратах – риддеры. При положительной реакции раствор в лунках окрашивается в желтый цвет, при отрицательной реакции – бесцветная. Окончательные результаты выдает риддер – цифровые показатели оптической плотности раствора в лунках |
Станция 22 «ПОСТАНОВКА АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ПРОБЫ В ДИАГНОСТИКЕ ТУБЕРКУЛЕЗА»
| Шаг 1 обработать кожу тампоном, смоченным 70%-м этиловым спиртом, затем другим тампоном, смоченным 1-2%-м раствором йода или другим дезинфектантом, разрешенным к применению для этих целей в установленном порядке, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 с. (средняя треть предплечья); | |
| Шаг 2 Положите шарик в лоток для использованного материала. | |
| Шаг 3 Возьмите стерильный сухой ватный шарик. Положите его под 5 палец левой руки. | |
| Шаг 4 Возьмите шприц в правую руку срезом иглы и шкалой вверх. | |
| Шаг 5 Захватите кистью левой руки предплечье ребенка, и пальцами натяните кожу снизу. | |
| Шаг 6 Введите в кожу только срез иглы, держа шприц почти параллельно коже. | |
| Шаг 7 Зафиксируйте первым пальцем левой руки муфту иглы, прижав ее к коже. | |
| Шаг 8 Перенесите на поршень правую руку и, надавливая на поршень введите туберкулин. Внимание! в месте инъекции должен образоваться беловатый бугорок в виде «лимонной корочки» 4-5 мм в диаметре. | |
| Шаг 9 Извлеките иглу, не прижимая место инъекции сухим шариком | |
| Шаг 10 Пригласить пациента через 48 – 72 ч. Для учета результатов. |
Станция 23 «Забор проб испражнений для исследований на патогенную микрофлору»
| Шаг 1 Взять стерильную пробирку со средой накопления и стерильной ректальной петлей. | |
| Шаг 2 Больного уложить на кушетку на правый бок, ноги подтянуты к животу (согнуты в коленях). | |
| Шаг 3 Ректальную петлю вынуть из пробирки и ввести в прямую кишку вглубь на 5-8 см. | |
| Шаг 4 Ректальную петлю осторожно вынуть из прямой кишки и опустить в пробирку со средой обогащения. | |
| Шаг 5 Подписать пробирку: указать Ф.И.О., возраст, домашний адрес обследуемого, диагноз |
| Шаг 1 Подготовить стерильную баночку с лопаточкой для забора испражнений. | |
| Шаг 2 Непосредственно перед заборам материала (кала, испражнений) открыть баночку. | |
| Шаг 3 Забор испражнений (не менее 1,0 грамма) производят из нескольких мест лопаточкой, которая находится в баночке. | |
| Шаг 4 Лопаточку с фекалиями опускают в баночку, закрывают крышкой | |
| Шаг 5 Подписать баночку: указать Ф.И.О., возраст, домашний адрес обследуемого, диагноз |
Станция 25 «Забор отделяемого открытых инфицированных ран для микробиологических исследований»
| Шаг 1 Кожу вокруг раны предварительно обрабатывают спиртом (70%) или другим антисептиком. | |
| Шаг 2 Некротические массы, детрит, гной удаляют стерильной салфеткой. | |
| Шаг 3 Взятие материала (раневого отделяемого) проводится круговыми движениями стерильным тампоном от центра к периферии раны. | |
| Шаг 4 Раневое отделяемое на тампоне асептически переносится в пробирку с транспортной средой. | |
| Шаг 5 Подписать пробирку: указать Ф.И.О., возраст, домашний адрес обследуемого, диагноз |
| Шаг 1 провести предварительный туалет наружных половых органов | |
| Шаг 2 Попросить обследуемого выпустить небольшое количество мочи в мочеприемник или другую емкость | |
| Шаг 3 Затем произвести забор средней порции свободно выпущенной мочи, в количестве 3-5 мл в стерильную посуду (полимерную банку) с плотно прикручивающейся крышкой | |
| Шаг 4 Подписать баночку: указать Ф.И.О., возраст, домашний адрес обследуемого, диагноз |
Станция 27 «ПОСЕВ КРОВИ НА СТЕРИЛЬНОСТЬ»
| Шаг 1 обработать кожу тампоном, смоченным 70%-м этиловым спиртом, затем другим тампоном, смоченным 1-2%-м раствором йода или другим дезинфектантом, разрешенным к применению для этих целей в установленном порядке, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 с.; | |
| Шаг 2 Стерильным шприцем произвести венепункцию | |
| Шаг 3 Произвести забор крови (5 мл) в шприц | |
| Шаг 4 над пламенем спиртовки открыть флакон с двухфазной средой | |
| Шаг 5 внести кровь во флакон из шприца, предварительно сняв иглу | |
| Шаг 6 обжечь горлышко и пробку флакона в пламени спиртовки, закрыть флакон пробкой | |
| Шаг 7 осторожно, чтобы не замочить пробку флакона, перемешать его содержимое круговыми движениями. |
| <== предыдущая | | | следующая ==> |
| График подготовки и проведения коммуникационной кампании. Январь, 2016 г | | | Сер ету мен қызмет ету аясына байланысты банктік тәуекелдер сыртқы жэне ішкі деп бөлінеді |
Date: 2015-08-24; view: 830; Нарушение авторских прав; Помощь в написании работы --> СЮДА... |