Главная Случайная страница



Полезное:

Как сделать разговор полезным и приятным Как сделать объемную звезду своими руками Как сделать то, что делать не хочется? Как сделать погремушку Как сделать неотразимый комплимент Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами Как сделать идею коммерческой Как сделать хорошую растяжку ног? Как сделать наш разум здоровым? Как сделать, чтобы люди обманывали меньше Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили? Как сделать лучше себе и другим людям Как сделать свидание интересным?


Категории:

АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника







ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ГЛЮКОЗЫ ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫМ МЕТОДОМ





Принцип. Глюкоза окисляется в присутствии глюкозооксидазы согласно реакции: Глюкоза + О2 → глюконолактон + Н2О2. Образующаяся перекись водорода под действием пероксидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта: о-Дианизидин + Н2О2 → о-Дианизидин (ОКИСЛЕННЫЙ) + Н2О. Интенсивность окрашивания пропорциональна концентрации глюкозы.

Реактивы (по наборам НТПК «Анализ-Х», Белоруссия).

1. Буферный раствор, рН=6,0, 2х200 мл.

2. Реагент (смесь ферментов), 2х0,2 г.

3. Депротеинизирующий реактив (концентрат 30% ТХУ), 10 мл.

4. Стандарт глюкозы 5,55 моль/л, 2,0 мл.

5. Стандарт глюкозы 16,0 ммоль/л, 2,0 мл.

Набор рассчитан на 400 определений при расходе 1 мл рабочего реагента, или 200 определений при расходе 2 мл. Линейная область: 2-27 ммоль/л.

Приготовление рабочего реагента. За час до проведения анализа содержимое флакона 2 растворяют буферным раствором из флакона 1. Рабочий реагент хранится в темном месте при температуре 2-8оС в течение недели.

Определение концентрации глюкозы в плазме, сыворотке крови и моче. Мочу перед анализом разводят дист. водой в отношении 1:5 или 1:10, в зависимости от оказания качественной реакции, и результат умножают на коэффициент разведения. Компоненты в реакционной смеси отбирают в количествах согласно данным таблицы:

Ход определения

Отмерить (мл) Опытная проба Стандарт Холостая проба
Сыворотка, плазма, моча 0,01    
Стандарт глюкозы   0,01  
Дистиллированная вода     0,01
Рабочий реагент 1,00 1,00 1,00

Реакционную смесь перемешивают и инкубируют 15 мин при 37оС.

Измеряют оптическую плотность опытной пробы Аоп и стандартной пробы Аст против холостой пробы при длине волны 510 нм (сине-зеленый светофильтр), в кювете с рабочей шириной 10 мм.

Расчет концентрации глюкозы производят по формуле:

Аоп где Соп – концентрация в опытной пробе (моль/л),
Соп=
· Сст Аоп – оптическая плотность опыта,
Аст Аст - оптическая плотность стандарта,
Сст - концентрация стандарта (5,55 ммоль/л).



Определение глюкозы в цельной крови. Цельную кровь депротеинизируют 3% раствором ТХУ. Глюкозу определяют в надосадочной жидкости после центрифугирования. Объемы компонентов приведены в таблице:

Отмерить (мл) Опытная проба Стандарт Холостая проба
Цельная кровь 0,05    
Стандарт   0,05  
Дистиллированная вода     0,05
3% раствор ТХУ 0,5 0,5 0,5

Пробу перемешивают и центрифугируют 10 мин при 1500 об./мин.

Надосадочная жидкость 0,10 0,10 0,10
Рабочий реагент 1,00 1,00 1,00

 

Далее измерение проводят так же, как при анализе без депротеинирования. Расчет концентрации глюкозы производят по указанной выше формуле. В случаях, когда оптическая плотность опытной пробы превышает 0,85, образец разводят дистиллированной водой в соотношении 1:1, а полученный результат умножают на 2.

Нормальные величины:
Сыворотка (плазма): 4,2-6,1 ммоль/л.

В ходе выполнения аналитических исследований осуществляется контроль качества.








Date: 2015-07-17; view: 2121; Нарушение авторских прав



mydocx.ru - 2015-2021 year. (0.006 sec.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав - Пожаловаться на публикацию