Главная Случайная страница


Полезное:

Как сделать разговор полезным и приятным Как сделать объемную звезду своими руками Как сделать то, что делать не хочется? Как сделать погремушку Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами Как сделать идею коммерческой Как сделать хорошую растяжку ног? Как сделать наш разум здоровым? Как сделать, чтобы люди обманывали меньше Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили? Как сделать лучше себе и другим людям Как сделать свидание интересным?


Категории:

АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника






Лабораторная диагностика болезни Ауески





Болезнь Ауески (БА, псевдобешенство, инфекционный бульварный паралич, зудящая чума, бешеная чесотка) – остро протекающая болезнь с/х животных всех видов, пушных зверей и грызунов. Из млекопитающих устойчивы приматы. Молодые животные восприимчивее взрослых. Птицы не чувствительны. БА характеризуется признаками поражения головного и спинного мозга, сильным зудом и расчесами (у всех видов животных, кроме свиней).

Болезнь встречается во всех европейских странах, Южной и Северной Америке, Африке, Азии в виде энзоотий и наносит большой экономический ущерб.

Вирус болезни Ауески (ВБА) относится к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Varicellavirus. Впервые установил и описал болезнь в Европе венгерский учёный А. Ауески в 1902г.АГ вариантов у ВБА не установлено.Методом перекрестной ИФ установлено АГ родство ВБА и простого герпеса.Вирус индуцирует образование ВНА, КСА, ПА.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни, патологоанатомических из­менений и результатов лабораторных исследований.

Основные методы лабораторной диагностики: выделение вируса, пря­мая и непрямая иммунофлюоресценция, РДП, радиоиммунологический ме­тод, кожная проба, РН, РСК, ELISA и биопроба.

Выделение вируса. Взятие и подготовка материала. Для выделения возбуди­теля болезни Ауески используют головной мозг, кусочки легких, селезенки, печени, лимфатических узлов, миндалин, полученные при вскрытии погибших животных. При жизни от больных свиней вирус можно выделить из носовых секретов, в которых он появляется на 4-6-й день болезни и сохраняется в течение 5-11 дней после выздоровления. От абортировавших животных ис­пользуют плоды и плаценту.

При сборе материалов для вирусологического исследования следует помнить о неравномерном распределении вируса в разных участках мозга, поэтому, чтобы избежать ошибок при постановке диагноза, следует брать минимум 2-3 пробы из разных участков мозга, расположенных на некотором расстоянии друг от друга. Обычно при вскрытии отбирают кусочки мозжечка, продолговатого мозга из разных мест больших полушарий го­ловного мозга.

Собранный материал помещают в стерильные пенициллиновые флаконы или пробирки и доставляют в лабораторию в термосе со льдом. Материал можно консервировать в 50%-ном забуференном растворе глицерина (pН 7,2-7,4). Секреты носовой полости собирают стерильными ватными тампонами, которые вводят в носовые ходы, а затем погружают в пробирки с раствором Хенкса. содержащим антибиотики.

В сопроводительном документе необходимо дать сведения о проведении иммунизации животных и применяемой вакцине.

В лаборатории материалы обрабатывают обычными методами: готовят 10%-ную суспензию, центрифугируют при 3-5 тыс. об/мин в течение 15-30 мин. Материалы, консервированные глицерином, предварительно отмыва­ют от него.

Для большей вероятности выделения вируса и уменьшения количества исследуемых образцов кусочки из различных отделов мозга от одного жи­вотного объединяют в общую пробу, которую затем измельчают, обрабаты­вают антибиотиками и исследуют. Для лучшей сохраняемости вируса в суспензии к ней можно добавить 1-2% нормальной инактивированной сы­воротки крови телят. До использования суспензию лучше хранить и за­мороженном виде (минус 30°С) или при 4°С.

Заражение животных. В качестве лабораторной модели для выделения вируса Ауески из патологических материалов обычно используют двух кроликов массой 2-2,5 кг, которым внутримышечно или подкожно вводят по 1 мл 10%-ной суспензии исследуемого материала. Инкубацион­ный период в этом случае продолжается 36-48 ч. иногда он может длить­ся 4-6 дней, а в некоторых случаях — даже до 12 дней.

Различают энцефалитическую. менингеальную, паралитическую, зудневую и стертую формы болезни. Течение экспериментальной инфекции но многом зависит от способа заражения.

Энцефалитическая форма начинается беспокойством. переходящим в сильное возбуждение, — животное бегает по клетке, боязливо огля­дываясь, у него отмечают расширение зрачков, повисание ушей, скрежетание зубами, обильное истечение слюны изо рта. Возбуждение сменяется депрессией — больные кролики лежат на боку или на животе, задние лапы часто вытянуты, при попытке встать животные теряют равновесие и падают. Смерть наступает в период приступа возбуждения или угнетения; гибели часто предшествуют параличи конечностей.

Зудневая форма наиболее характерна для кроликов при внутримышеч­ном или подкожном введении материала. В положительных случаях у жи­вотных после 2-3-дневного инкубационного периода появляется сильный зуд в месте инокуляции. Вначале отмечают общее беспокойство, животное часто вздрагивает, оглядываясь на место введения материала, затем на­чинает лизать и вырывать шерсть в этой области. Часто можно наблюдать, как кролик с ожесточением грызет кожу и подлежащие мышечные ткани на месте инъекции. Иногда зуд отмечают и на других участках тела, что приводит к особенно сильному беспокойству. Кролик падает на бок и мо­жет погибнуть внезапно, без развития параличей, или же они появляются незадолго до смерти.

Менингеальная форма характеризуется сильным возбуждением, скре­жетом зубов и опистотонусом. Животное падает на бок и погибает при наличии клонических судорог. Однако при вскрытии в менингеальных обо­лочках макроскопически иногда не обнаруживают никаких следов воспале­ния. Они могут быть выявлены лишь гистологически (следы лимфоцитарного менингита).

При стертых и молниеносных формах болезни Ауески у большинства кроликов не проявляется никаких симптомов болезни. Погибают они обычно ночью. Вечером накануне гибели животное кажется вполне нормальным, а утром обнаруживают его труп в характерном положении — на боку.

Биопробу считают положительной, если кролики погибают с клиниче­скими признаками болезни Ауески (нервная клиника, зуд, расчесы) через 2-10 дней после инокуляции суспензии из патологического материала. Ес­ли кролики погибают без признаков болезни Ауески, биопробу повторяют, используя патологический материал первого пассажа. Считают, что иноку­ляция материала в переднюю камеру глаза кролика приводит к характерной зудневой форме болезни. Материалом для выделения вируса от погибших кроликов служат ткани головного и спинного мозга, а также паренхима­тозные органы (легкие, печень). Гибель кроликов после введения патологи­ческого материала от свиней или пушных зверей без признаков зуда и, расчесов может свидетельствовать о выделении вакцинных штаммов виру­са болезни Ауески.

Показано, что культуры клеток так же чувствительны к вирусу Ауес­ки, как и кролики; к тому же они могут быть использованы для лабора­торной диагностики атипичного течения болезни, при котором опыты по выявлению вируса в мозгу свиней путем заражения кроликов дают отрица­тельные или нетипичные результаты.

Заражение культуры клеток. Для выделения вируса от павших, больных свиней и кроликов обычно используют первично-трипсинизированные культуры клеток почек и щитовидной железы свиней, семенни­ков телят, фибробластов куриных эмбрионов, перевиваемые линии РК-15, ВНК-21. К вирусу высокочувствительны субкультуры первого пассажа кле­ток почки поросенка и крупного рогатого скота.

При первичном выделении вируса из патологического материала лучше помещать пробирки во вращающийся барабан, что способствует сокраще­нию сроков появления цитопатогенного действия. Для выявления послед­него пробирки на протяжении 5 сут ежедневно просматривают под микро­скопом. При отсутствии цитопатических изменений на 5-й день культуры подвергают однократному замораживанию и оттаиванию и делают повтор­ный пассаж. Каждый материал пассируют 3-5 раз.

При первичном выделении вируса признаки цитопатогенного действия появляются на 4-5-й день после инокуляции культуры. В последующих пассажах сроки появления ЦПД сокращаются до 15-20 ч, причем оно становится более выраженным. Характер цитопатических изменений в раз­личных культурах может быть неодинаковым, что обусловлено различным действием вируса на клетки эпителиального и фибробластического типов. В культуре клеток почки поросенка, эмбриона свиньи или крольчонка цитопатогенные действия вируса выражаются в образовании синцития. Сна­чала в культуре появляются очаги округлых клеток, границы между кото­рыми исчезают; а ядра перемещаются к центру и образуют конгломераты, окруженные обшей оболочкой. Через несколько часов группы этих клеток принимают шарообразную форму, в цитоплазме их появляется зернистость. Затем происходит обильное отслаивание клеток с поверхности стекла.

В культуре фибробластов куриного эмбриона цитопатогенное действие вируса проявляется в округлении клеток, появлении зернистости и вакуоли­зации цитоплазмы с последующим отслоением клеток от поверхности стекла. Титры вируса в период максимального развития ЦПД обычно достигают 106,5-107,5 ТЦД 50/мл.

Диагноз на болезнь Ауески ставят в том случае, если видовая принад­лежность вируса, выделенного в культуре клеток, подтверждена в РН. Ви­рулентные штаммы вируса образуют типичные симпласты. Штаммы, много­кратно пассированные в культуре куриных фибробластов, вызывают менее выражении симпластообразование и пролиферацию клеток. Штаммы, пассированные в культуре фибробластов куриных эмбрионов в 10-50 раз сни­жают свою вирулентность.

Date: 2016-02-19; view: 475; Нарушение авторских прав; Помощь в написании работы --> СЮДА...



mydocx.ru - 2015-2024 year. (0.006 sec.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав - Пожаловаться на публикацию