Определение неорганического фосфора в сыворотке крови

Реактивы. 1. 10% раствор трихлоруксусной кислоты.

2. Раствор молибдата аммония: 5г молибденово-кислого аммония доводят до 100мл 5% серной кислотой.

3. 5% серная кислота: 140мл концентрированной серной кислоты смешать с 860мл дистиллированной воды.

4. 1% раствор аскорбиновой кислоты на 0,1н растворе соляной кислоты.

5. Стандартные растворы фосфора:

а) основной – 4,394г КН₂РО₄, высушенного до постоянного веса и доведенного дистиллированной водой до 1л. В 1мл такого раствора содержится 1мг фосфора;

б) рабочий – 1мл основного стандартного раствора доводят дистиллированной водой до 50мл. В 1мл такого раствора содержится 0,02мг фосфора.

Оборудование: фотоэлектроколориметр, центрифуга, центрифужные пробирки, обыкновенные пробирки, пипетки на 5мл, пипетки на 1мл.

Принцип определения. Белки крови осаждают трихлоруксусной кислотой. Неорганический фосфор после осаждения белков реагирует с молибденовой кислотой с образованием фосфомолибденовой кислоты, которая восстанавливается аскорбиновой кислотой до фосфомолибденового комплекса, окрашенного в синий цвет. Интенсивность окраски пропорциональна количеству неорганического фосфора.

Ход определения. В центрифужную пробирку последовательно вносят 3 мл дистиллированной воды, 1мл сыворотки крови, 1мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты. Содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой и через 5минут центрифугируют при 2500-3000 об/сек в течение 15-20 мин.

В опытную пробирку (О) вносят 2,5мл центрифугата крови (что соответствует 0,5мл сыворотки крови), добавляют 0,5мл раствора молибдата аммония, 0,5мл 1% раствора аскорбиновой кислоты и 6,5мл дистиллированной воды. Перемешивают путем переливания из одной пробирки в другую.

Одновременно готовят стандартную пробу. В пробирку для стандартного раствора (С) вносят 1мл рабочего стандартного раствора фосфора: 0,5мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты, 0,5мл молибдата аммония, 0,5мл 1% раствора аскорбиновой кислоты и 7,5 мл дистиллированной воды.

Через 10 минут опытную и стандартную пробы колориметрируют на фотоэлектроколориметре с красным светофильтром при длине волны 660-680 нм, в кювете на 10мм, против дистиллированной воды.

Протокол работы.

1. Экстинкция стандартной пробы..…

2. Экстинкция опытной пробы..…

3. Количество неорганического фосфора в исследуемой сыворотке крови выражают в мг% и находят по формуле:

х = Е_о· 0, 0 2 · 100 / Е_о · 0, 0 5, где

Х - количество неорганического фосфора в исследуемой сыворотке крови, мг%;

Е_о - экстинкция опытной пробы;

Е_с - экстинкция стандартной пробы;

0,02 - количество фосфора в 1мл рабочего стандартного раствора фосфора в мг;

0,5 – количество мл сыворотки крови взятой для конечного определения;

100 – коэффициент пересчета количества фосфора на 100 мл сыворотки крови;

Примечание. Для пересчета мг% в ммоль/л результат следует умножить на коэффициент 0,323, т.е. 10:31.

Вывод: Биохимическим анализом установлено, что в сыворотке крови исследуемого животного содержится … ммоль/л неорганического фосфора.

Список литературы

1. Авраменко, П.С. Справочник по приготовлению, хранению и использованию кормов. / П.С.Авраменко, Л.М.Постовалова, Н.В.Главацкий; под редакцией П.С. Авраменко – Минск: Ураджай, 1993. – 351 с.

2. Аргунов, М.Н. Биохимические изменения в организме животных при экспериментальной интоксикации кадмием / М.Н. Аргунов, Е.М. Свиридов // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: материалы междунар. науч.-практ. конф., Воронеж, 23-25 сен. 2002 г. – Воронеж, 2002. – С.113-115.

3. Биохимия животных: учебник / А.В.Чечеткин [и др.]. – М.: Высшая школа, 1982. – 511 с.

4. Богданова, К.С. Профилактика нарушений обмена веществ у сельскохозяйственных животных / К.С. Богданова, Г.А. Терентьева. – М.: Агропромиздат, 1986. – 380 с.

5. Гертман, А.М. Никелевый токсикоз телят техногенной провинции южного Урала / А.М.Гертман, М.И.Рабинович // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: материалы междунар. науч.-практ. конф., Воронеж, 23-25 сен. 2002 г. – Воронеж, 2002. – С.176-179.

6. Гизатуллин Р.Р., Новиков В.А. Фармакоррекция иммунобиологической реактивности организма при хронической интоксикации животных свинцом / Р.Р.Гизатуллин, В.А.Новиков // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: материалы междунар. науч.-практ. конф., Воронеж, 23-25 сен. 2002 г. – Воронеж, 2002. – С.193-195.

7. Кальницкий, Б.Д. Минеральные вещества в кормлении животных / Б.Д.Кальницкий. – Л.: Агропромиздат. Ленингр. отд-ние, 1985.- 207 с.

8. Клейменов, Н.И. Минеральное питание скота на комплексах и фермах / Н.И.Клейменов, М.Ш.Магомедов, А.М.Венедиктов. – М.: Россельхозиздат, 1987. – 191 с.

9. Кондрахин, И.П. Алиментарные и эндокринные болезни животных / И.П.Кондрахин. - М.: Агропромиздат, 1989. – 256 с.

10. Кононский, А.И. Биохимия животных: учеб. пособие / А.И. Кононский. – Киев: Вища школа, 1980. – 432 с.

11. Микроэлементозы сельскохозяйственных животных / А.И. Федоров [и др.]. – Минск: Ураджай, 1986. – 95 с.

12. Микроэлементозы человека / А.П. Авцын [и др.]. - М.: Медицина, 1991. – 496 с.

13. Сапего, В.И. Эффективность применения микроэлементов в животноводстве / В.И.Сапего. – Минск: БелНИИНТИ, 1985. – 48 с.

14. Слесарев, И.К. Минеральное питание крупного рогатого скота / И.К.Слесарев, А.С.Зеньков. – Минск: Ураджай, 1987. - 63 с.

15. Справочник по ветеринарной медицине.– СПб: Изд-во «Лань», 2004. – 912 с.

16. Тиво, П.Ф. Тяжелые металлы и экология / П.Ф.Тиво, И.Г.Быцко. – Минск: ЮНИПОЛ, 1996. – С. 21 – 30.

17. Уразаев, Н.А. Профилактика нарушений обмена веществ у крупного рогатого скота / Н.А.Уразаев. – Л.: Агропромиздат. Ленингр. отд-ние, 1986. – 159 с.

18. Хазипов, Н.З. Биохимия животных: учебник / Н.З.Хазипов, А.Н. Аскарова. – Казань: КГАВМ, 2003. – 312 с.

Учебное издание

Позывайло Оксана Петровна

Елисейкин Дмитрий Владимирович

Соболев Дмитрий Тенгизович

Date: 2015-05-22; view: 756; Нарушение авторских прав