Учебно-исследовательская работа студентов на занятии

1. Проделать лабораторную работу "Определение остаточного азота и билирубина в сыворотке крови".

2. Сделать выводы по результатам проведенных опытов. Оформить результаты опытов.

3. Подготовиться к защите лабораторной работы и решению задач (ориентировочные задачи и вопросы приведены ниже).

Лабораторная работа

I. Определение остаточного азота в сыворотке крови.

Принцип метода. Остаточный азот – это небелковый азот биологических жидкостей. Гипобромитный метод его определения основан на свойстве гипобромита разрушаться при взаимодействие с азотистыми веществами безбелкового центрифугата. Остаток непрореагировавшего гипобромита определяют йодометрически – титрованием тиосульфатом натрия. Для расчета количества остаточного азота определяют количество разрушенного гипобромита, как разность между титром контрольной пробы (не содержащей остаточного азота) и опытной пробы (с остаточным азотом).

Ход работы. Для осаждения белков в пробирку наливают 1 мл дистиллированной воды, 0,1 мл сыворотки и 4,0 мл осаждающего реактива. Через 10 мин смесь центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин. За это время готовят рабочий раствор гипобромита, смешивая 9 частей реактива А и 1 часть реактива В. В колбу для титрования отбирают 4 мл центрифугата, добавляют 5 мл рабочего раствора гипобромита, перемешивают и оставляют на 1-2 мин. Затем добавляют несколько кристалликов КI, 3 мл раствора НСl, смесь взбалтывают и титруют 0,005Н раствором тиосульфата до слабо-желтого цвета. Добавляют 2-3 капли раствора крахмала и дотитровывают до обесцвечивания. Одновременно с опытной готовят контрольную пробу, содержащую 4 мл осаждающего реактива, 5 мл рабочего раствора гипобромита, несколько кристалликов KI и 3 мл раствора HCI. Контрольную пробу титруют также до обесцвечивания.

Содержание остаточного азота рассчитывают по формуле:

(К - О) х 21,4 = ммоль/л, где К – количество тиосульфата, пошедшего на титрование контрольной пробы, О – на титрование опытной пробы, 21,4- коэффициент пересчета.

Нормальное содержание остаточного азота – 14,3 - 28,6 ммоль/л.

Диагностическое значение определения остаточного азота

Ретенционная (связанная с выведением) почечная гиперазотемия наблюдается при различных заболеваниях почек. Ретенционная непочечная гиперазотемия наблюдается при недостаточности кровообращения, травматическом шоке, опухолях мочевого пузыря.

Продукционная гиперазотемия сопровождается процессом усиления распада белка - при туберкулезе, диабете, тяжелом циррозе печени, при инфекционных заболеваниях, сопровождающихся лихорадкой. Понижение остаточного азота наблюдается при недостаточном питании, иногда – при беременности.

2. Определение билирубина в сыворотке крови.

Принцип метода. Связанный билирубин при взаимодействии с диазореактивом (диазофенилсульфоновая кислота) образует розовое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна концентрации билирубина, вступающего в прямую реакцию. Кофеиновый реактив переводит свободный билирубин в растворимое состояние, благодаря чему он также реагирует с диазореактивом, образуя розовое окрашивание. По интенсивности этого суммарного окрашивания определяют концентрацию общего билирубина. А концентрацию свободного билирубина определяют как разность между общим и связанным билирубином.

Ход работы. В 3 пробирки приливают реактивы по схеме:

Через 5-10 мин после прибавления диазореактива колориметрируют пробу на связанный билирубин (при более длительном стоянии пробы в реакцию вступает несвязанный билирубин, что искажает результат). Пробу на общий билирубин колориметрируют через 20 мин после добавления диазореактива. Колориметрирование проводят при зеленом светофильтре в кювете толщиной 0,5 см против контроля. Концентрацию общего и связанного билирубина определяют по калибровочному графику.

Нормальное содержание билирубина в сыворотке: общий – 1,7-20,5 мкмоль/л, связанный – 0,86-4,3 мкмоль/л, свободный – 1,7-17,1 мкмоль/л.

Диагностическое значение определения билирубина сыворотки крови

Причины, вызывающие гипербилирубинемию, различны. Желтуха появляется, когда уровень билирубина в крови превышает 43 мкмоль/л. Заболевания, вызывающие повышение связанного билирубина: вирусный гепатит, цирроз печени, опухоль печени и метастазы, жировая дистрофия.

Заболевания, вызывающие повышение несвязанного билирубина: гемолитическая анемия, пернециозная анемия, желтуха новорожденных.

Проверка качества усвоения знаний (конечный уровень)

А) Вопросы для защиты лабораторной работы

1. Что понимают под термином "остаточный азот"?

2. Назовите основные компоненты остаточного азота.

3. Что такое гиперазотемия? Какие виды гиперазотемий вы знаете?

4. На чем основан гипобромитный метод определения остаточного азота?

5. Какие индикаторы используются в данном методе?

6. Что такое йодометрическое титрование?

7. По какой формуле рассчитывается содержание остаточного азота?

8. Какова норма остаточного азота в сыворотке крови?

9. При каких заболеваниях снижается остаточный азот?

10. Объясните термины: общий билирубин, свободный билирубин, связанный билирубин, прямой билирубин, непрямой билирубин, конъюгированный билирубин, некоъюгированный билирубин.

11. Как образуется свободный билирубин?

12. Зачем в данном методе используется кофеиновый реактив?

13. Почему пробу на связанный билирубин колориметрируют точно через 5-10 минут?

14. Каков принцип метода определения билирубина в сыворотке крови?

15. Как определяют концентрацию общего и связанного билирубина?

16. Назовите причины гипербилирубинемии.

17. Какова норма свободного, связанного и общего билирубина?

б) ситуационные задачи (УИРС)

1. Ребенок перенес инфекционное заболевание. Какие изменения белковых фракций плазмы крови можно ожидать?

2. У больного появились отеки. С изменением концентрации каких белков плазмы крови это состояние может быть связано и почему?

3. Уровень каких белков плазмы крови повышается при беременности?

4. Какой специфический белок плазмы крови следует использовать для профилактики гриппа?

5. Человека в лесу укусил клещ. Какой лечебный препарат необходимо ему ввести? Как его готовят?

6. В биохимической лаборатории двум однофамильцам определили белок в плазме крови, при этом на бланке не указали инициалы. Содержание белка в одном анализе было 30 г/л, в другом – 100 г/л. У одного больного - обширные отеки, а у другого – пневмония. Укажите, кому принадлежит соответствующий анализ. Вывод обоснуйте.

7. В кардиологическое отделение поступил больной с нарушением кровообращения, понижением артериального давления и признаками интоксикации. Зачем врач назначил больному анализ на остаточный азот?

8. Составьте схему реакций получения холестерина из глюкозы.

9. У новорожденного через 3 дня после рождения появилась желтуха. Общий билирубин крови - 30 мкмоль/л, непрямой - 27 мкмоль/л. Через 2 недели желтуха исчезла. Назовите вид желтухи.

10. У больного 43 лет, через 2 дня после подъема температуры до 38^оС появилось желтушное окрашивание кожи и слизистых, моча потемнела, кал обесцветился. В крови уровень общего билирубина - 40 мкмоль/л, прямого 15 мкмоль/л. В моче обнаруживается уробилин и билирубин. Какой вид желтухи вы предполагаете?

11. Больной жалуется на сильные боли в правом подреберье. Отмечается желтушность кожи и слизистых, зуд кожных покровов. Моча темная, кал обесцвеченный. В крови уровень общего билирубина 55 мкмоль/л, прямого - 40 мкмоль/л. В моче определяется билирубин. Вид желтухи? Активность каких ферментов поможет в диагностике заболевания?

12. Заполните в тетради следующую таблицу:

Примечание: В пустых графах поставьте обозначения: Н - норма,

­ - повышено, ¯ - понижено, «+» - определяется, «0» - не определяется.

13. У больного после переливания крови появилось желтушное окрашивание кожи и слизистых. Какой вид желтухи можно заподозрить? Как изменятся показатели пигментного обмена в крови и моче?

14. У новорожденного сразу после рождения обнаружилась желтуха. Общий билирубин в крови - 60 мкмоль/л, непрямой - 53 мкмоль/л. Вид желтухи?

15. Как скажется на обмене нуклеиновых кислот в организме ограничение приема нуклеопротеидов с пищей? Возможно ли их полное исключение из пищевого рациона? Назначьте диету больному подагрой. Что такое оротацидурия?

16. Почему при циррозе печени имеет место гипоальбуминемия?

17. Какие биохимические анализы вы бы назначили больному при подозрении на паренхиматозную желтуху и почему? Какие результаты при этом ожидаете получить?

18. Напишите схему превращений аспартата в глюкозу и жир.

19. Приведите схему превращений жира, в результате которых можно получить аланин.