Методы идентификации нуклеиновых кислот

Существуют два способа молекулярно-генетического анализа – метод гибридизации и метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Методы выявляют ДНК или РНК в любой биологической жидкости. В основе этих двух методов лежит свойство нуклеиновых кислот к саморепродукции in vitro. Наиболее широко используется ПЦР (специфичность 99-100 %, чувствительность 98~99 %).

Метод ПЦР основан на многократном избирательном копировании определенного участка ДНК с помощью ферментов in vitro (в искусственных условиях). При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданные условия, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Для проведения самой простой ПЦР нужны такие компоненты:

· ДНК-матрица, то есть фрагмент ДНК, что содержит тот участок, который нужно амплифицировать.

· Два праймера, комплементарного концам необходимого фрагменту.

· Термостабильная ДНК-полимераза.

· Дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T).

· Буферный раствор.

Вирусологический метод - культивирование вирусов, их индикация и идентификация. Материалами для вирусологического исследования могут быть кровь, различные секреты и экскреты, биоптаты органов и тканей человека. Исследование крови часто проводят в целях диагностики арбовирусных заболеваний. В слюне могут быть обнаружены вирусы бешенства, эпидемического паротита, простого герпеса. Носоглоточные смывы служат для выделения возбудителя гриппа, кори, риновирусов, респираторно-синцитиального вируса, аденовирусов. В смывах с конъюнктивы обнаруживают аденовирусы. Из фекалий выделяют энтеровирусы, адено-, рео- и ротавирусы.

Для выделения вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы, иногда лабораторных животных.
Источник получения клеток — ткани, извлечённые у человека при операции, органы эмбрионов, животных и птиц. Используют нормальные или злокачественно перерождённые ткани: эпителиальные, фибробластного типа и смешанные. Вирусы человека лучше размножаются в культурах клеток человека или почечных клеток обезьян.

Для большинства патогенных вирусов характерно наличие тканевой и типовой специфичности. Например, полиовирус репродуцируется только в клетках приматов, что определяет необходимость подбора соответствующей культуры. Для выделения неизвестного возбудителя целесообразно одномоментное заражение 3-4 культур клеток, так как только одна из них может оказаться чувствительной.

Бактериологический посев (культуральное или микробиологическое исследование) — лабораторное исследование, при котором биоматериал, в котором предположительно могут находиться патогенные микроорганизмы, помещают в благоприятную для их размножения среду при определенных температурных параметрах с последующей оценкой результатов и определения чувствительности к антибактериальным препаратам. Метод ценен для определения условно-патогенной микрофлоры, определения чувствительности к антибиотикам.

Из всех методов диагностики инфекционных заболеваний это самый дорогой и трудоемкий метод. Однако эти его недостатки с лихвой компенсируются: если анализ на инфекцию методом посева дает положительный результат, можно не сомневаться в присутствии этих бактерий в организме.

Материал для исследования можно брать из полости рта, прямой кишки, половых органов. Правила забора аналогичны забору при ПЦР-диагностике. Сроки выполнения различны — от нескольких дней до нескольких недель (зависят от определяемого возбудителя).