Выделение и идентификация возбудителей брадзота

Культивирование. С. septicum и С. novyi — строгие анаэробы, очень чувствительны к кис­лороду, оптимум рН — 7,6-7,8, температуры — 37-38° С.

Посевы производят из отечной подкожной клетчатки, подслизистой сычуга, паренхиматозных органов, экссудата грудной и брюшной по­лостей в среду Кита-Тароцци, глюкозо-кровяной агар в чашках Петри.

Учитывая, что возбудители строгие анаэробы, целесообразно, по воз­можности, применять среды, содержащие цистеин, натрия тиогликолят для создания оптимального окислительно-восстановительного потенци­ала сред. Чашки с посевами инкубируют в анаэростате. Время инкубирования 24-48 часов.

Характер роста возбудителей на питательных средах. Рост С.septicum на среде Кита-Тароцци характеризуется интенсив­ным равномерным помутнением и образованием газа. На глюкозо-кровя­ном агаре возбудитель образует кружевные сплетения в виде «нитей-ара­бесок» с зоной гемолиза. В агаре столбиком (1%-ный) формирует колонии диаметром 1-2 мм с уплотненным центром и радиально отходящими ни­тевидными перепутанными отростками. В глубине более плотного агара (2%-ный) колонии чечевицеобразной формы, иногда с отростками, корич­невато-желтоватого цвета. При росте в мозговой среде образует газ.

С. novyi в жидкой питательной среде растет с ее помутнением, обра­зованием однородного или хлопьевидного осадка, газообразование слабое. С. novyi тип В (С. gigas) на глюкозо-кровяном агаре формирует плоские, шероховатые колонии с неправильными бахромчатыми края­ми и отростками, образующими на периферии параллельные петли. Внутренняя структура колоний обычно неоднородна (мозаичность, кри­сталлы). Колонии С. novyi типов А, В, С нередко проявляют тенденцию к образованию дочерних колоний. Колонии окружены зоной гемолиза. Колонии С. novyi типа D чаще мелкие, рассыпчатые. В агаре высоким столбиком с глюкозой колонии С. novyi напоминают кусочки ваты с уплотненным, более темным (коричневатым, желтоватым) центром или имеют форму линзы.

Морфология клеток возбудителей в культуре. В мазках из культуры клетки С. novyi крупные, грамположительные прямые или слегка изогнутые палочки (0,6-1,4x2-17 мкм) с закруг­ленными или обрубленными концами, перитрихи, клетки располагают­ся единично или парами. Споры овальные, центральные или субтерми­нальные, лучше образуются на средах, бедных утилизируемыми углево­дами и другими питательными веществами. В старых культурах клетки возбудителя окрашиваются грамотрицательно.

C. septicum — полиморфная, грамположительная палочковидная бак­терия размером 0,6-0,8x2-35 мкм, располагается единично или пара­
ми. В старых культурах окрашивается грамотрицательно, капсулу не
образует, перитрих, споры центральные или субтерминальные.

Идентификация С. novyi и С. septicum по ферментативным свойствам. При обнаружении в посевах бактерий с типичными для С. novyi и C.septicum культуральными, морфологическими и тинкториальными свой­ствами их отвивают для получения чистых культур и определяют наличие лецитиназы, липазы, желатиназы, казеиназы, индола, способность расщеп­лять глюкозу, лактозу, сахарозу, мальтозу (табл. 58). Используют для иден­тификации тест-системы (см. выше).

Таблица 58 - Ферментативные свойства С. septicum u С. novyi

V — варьирующий признак; нд — нет данных.

Дополнительными характеристиками С. novyi являются токсигенные свойства. С. novyi типов А и В синтезируют токсин «альфа», который обла­дает летальным и некротизирующим действием. С. novyi типов В и D (С. haemolyticum) продуцируют бета-токсин, причем тип D в большем ко­личестве, а тип В — в меньшем. С. novyi типа С указанные токсины не образует. В реакции нейтрализации С. novyi типов А и В за счет общего альфа-токсина неразличимы. В рутинной диагностической практике реак­цию нейтрализации не используют.

Биопроба. В соответствии с «Методическими указаниями по лабораторной диагнос­тике брадзота овец» (1984) биопробу проводят одновременно с посевом исследуемого материала на питательные среды для выделения культуры возбудителя или проверки вирулентности выделенной культуры. Для зара­жения используют морских свинок массой 300-400 г. Патологический ма­териал измельчают в стерильной ступке в МПБ. Двум морским свинкам вводят подкожно в область брюшных мышц 0,5-1,0 мл тканевой суспен­зии или культуры. При наличии возбудителей в материале животные поги­бают через 16-48 часов. Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 8 суток.

При наличии в исследуемом материале С. septicum у павших морских свинок на месте инъекции обнаруживают следующие изменения: кожа лег­ко отделяется от мышц, мышцы влажные, светло-красного цвета, в под­кожной клетчатке пузырьки газа, кишечник вздут, в сердечной сорочке и грудной полости значительный объем транссудата.Заражение морских свинок С. novyi дает следующие патологоанатомические изменения: на месте инъекции студенистый отек соединительной тка­ни, мышцы бледные. С. sordellii вызывает сходную картину изменений.

Павших животных подвергают бактериологическому исследова­нию. Обязательно делают мазки-отпечатки с серозных покровов пе­чени. Клетки С. septicum в таких препаратах имеют форму длинных нитей.