Примечаниек таблице 57

(+) — мыши пали, у морских свинок и кроликов некроз на месте введения;

(-) — мыши живы, у морских свинок и кроликов некроз отсутствует;

(х) — результат не учитывается

Выделение культуры С. perfringens, определение ее токсигенных свойств. С. perfringens является относительно аэротолерантным видом анаэроб­ных клостридий. Температурный оптимум для типов А и D составляет 45° С, В и С — 37-45° С.

Согласно «Методическим указаниям...» в лабораториях РФ рекомендуется посев из содержимого кишечника и паренхиматозных орга­нов делать на среду Кита-Тароцци с подавлением роста сопутствующей микрофлоры следующими способами. Применяют метод частых пересевов выросшей культуры с интервалом 2-3 часа на свежую среду Кита-Та­роцци или засеянные пробирки прогревают при 65° С в течение 10 минут и затем культивируют 18 часов при 38° С. Рост С.perfringens в среде Кита- Тароцци — быстрый (3-8 часов), характеризуется помутнением, бурным га­зообразованием, образованием гомогенного или слизистого осадка. Из выросших культур делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. Клетки С. perfringens в мазках из культуры выглядят как короткие, толстые, грамположительные палочки с обрубленными концами, жгутиков не имеют. В старых культурах клетки образуют центральные или субтерми­нальные споры. При незначительной контаминации культуры посторонней микрофлорой производят дробный высев на глюкозо-кровяной агар Цейсслера. Посевы инкубируют при 37-38° С в течение суток.
С. perfringens на кровяном агаре формирует колонии трех типов диаметром 2-5 мм: S — гладкие, М — слизистые, R — махровые. Гладкие колонии первоначаль­но напоминают капельки росы, затем прозрачность исчезает, колонии при­обретают белую или сероватую окраску. Форма круглая, рельеф выпук­лый, поверхность блестящая, гладкая, края ровные.
М-колонии формиру­ют капсулообразующие клетки, они сходны с

S-колониями, но имеют слизи­стую консистенцию. Шероховатые колонии — неправильной формы, края фестончатые. По мере пребывания на воздухе колонии всех типов приобре­тают зеленоватый оттенок, что является характерным признаком. Колонии окружены зоной гемолиза, полного или частичного. Зона гемолиза может быть двойной: вокруг колоний полный гемолиз (действие гемолизинов), на отдалении — неполный (действие лецитиназы). Среда в процессе роста С. perfringens становится буро-коричневой.

Из типичных колоний делают мазки, окрашивают по Граму, микроско-пируют. При обнаружении характерных для С. perfringens по морфологии и тинкториальным свойствам клеток культуру отвивают на среду Кита-Тароцци, выращивают 8-16 часов при 37-38° С и определяют в биопро­бе на мышах наличие токсина (методику см. выше).

Если предполагается наличие С. perfringens типов Е и D, токсин перед постановкой опыта на животных переводят из состояния протоксина в ток­син. Предварительно культуру подщелачивают до рН 8,0-8,2, вносят 0,25% трипсина или 0,5% панкреатина и выдерживают, встряхивая, 2 часа при 37-38° С. При наличии токсина типа С токсичность снижается, В — со­храняется, D и Е — увеличивается. Тип токсина устанавливают в реакции нейтрализации, как указано выше. В настоящее время фирма Techlab Inc. выпускает диагностический набор для иммуноферментного выявления токсинов возбудителя в содержимом кишечника. Перспективно применение для идентификации токсичных штам­мов С. perfringens ПЦР-диагностики.

С целью идентификации выделенных культур на видовом уровне изу­чают их ферментативные свойства. Для С. perfringens характерно нали­чие лецитиназы, желатиназы, казеиназы, способности расщеплять с обра­зованием кислоты глюкозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, свертывать мо­локо за 8-10 часов, при этом образуются прозрачная сыворотка и рых­лый сгусток казеина. Принимают во внимание, что штаммы типа А рас­щепляют инулин, но инертны по отношению к глицерину, типа Д утилизи­руют глицерин, но не инулин, типы В и С не разлагают оба эти углевода. Также используют тест-системы API 20A, Anacrotest 23 и др. С. perfringens — единственный вид клостридий, образующий капсулу, жгу­тиков не имеет.

Характер патологоанатомических изменений у морских свинок, зара­женных подкожно, описан в разделе «Злокачественный отек».