Главная Случайная страница


Полезное:

Как сделать разговор полезным и приятным Как сделать объемную звезду своими руками Как сделать то, что делать не хочется? Как сделать погремушку Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами Как сделать идею коммерческой Как сделать хорошую растяжку ног? Как сделать наш разум здоровым? Как сделать, чтобы люди обманывали меньше Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили? Как сделать лучше себе и другим людям Как сделать свидание интересным?


Категории:

АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника






Для постановки РМА





Серогруппа Серовар Рекомендуемые штаммы
Pomona Pomona Pomona
Tarassovi tarassovi Perepelicin (Mitis Jjhson)
Grippotyphosa grippotyphosa Moskva V (Valbuzzi)
Hebdomadis kabura (borincana, hebdomadis) Kabura (HS-22, hebdomadis)
Sejroe polonica (sejroe, wolffi, hardjo) 493 Poland (M-84, 3705, hardjoprajitno)
Mini    
Jcterohaemorrhagiae szwajizak Szwajizak
Canicola copenhageni (icterohaemorrhagiae) M-20, Waijnberg (RgA)
Bataviae canicola Hond Utrecht IV
Javanica djatzi (bativiae) HS-26 (Van Tienen)
Australis poi (javanica) Poi (Veldrat Bataviae 46)
Autumnalis australis (brtislava) Ballico (lez Bratislava)
Ballum autumnalis (rachmat) Akijami A (Rachmat)
Pyrogenes balum (castellonis) Mus 127(CaseteUon3)
Cynopteri pyrodenes Salinem
Panama cynopteri Vleermuis 3568 (3522C)
Cclledoni panama CZ-214-K
Shermani celledoni Celledoni
Djasiman shermani LT-821
Sarmin djasiman Djasiman
Louisiana sarmin Sarmin
Ranarum louisiana LSU-1945
Manhao ranarum ISF
  manhoa L105

 

Культуры лептоспир, используемые в качестве антигенов при определе­нии этиологической структуры и обследовании импортируемого скота приведены в таблице 52. В хозяйствах с установленной этиологией и при транспортировке животных в пределах страны используют культуры серогрупп Pomona, Tarassovi, Canicola, Hebdomadis, Sejoroe, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae.

Сыворотки крови исследуют в разведениях 1:100, 1:500, 1:2500 с уче­том объема антигена, при необходимости определяют предельный титр. Раз­веденную сыворотку на 0,85%-ном растворе натрия хлорида разливают по 0,1 мл в различное количество лунок планшеты в зависимости от числа используемых антигенов. Затем в лунки вносят по 0,1 мл антигена. Контро­лем является культура лептоспир + физиологический раствор (агглютина­ции не должно быть). Компоненты перемешивают встряхиванием, выдер­живают час при 30 -37°С, затем учитывают результат путем микроскопии препарата из содержимого каждой лунки при увеличении 20x10. Капли не покрывают покровным стеклом и наносят на предметное стекло бактерио­логической петлей диаметром 3 мм.

Результат оценивают по следующим критериям: (+ + + +) — агглюти­нированы 100% лептоспир; (+ + +) — агглютинированы 75% лептоспир; (+ +) — агглютинированы 50% лептоспир; (+) — агглютинированы 25% лептоспир; (—) — агглютинация отсутствует. Агглютинация проявляется в образовании конгломератов из 3-5 до нескольких десятков лептоспир при возможном лизисе клеток в малых разведениях сыворотки. Как поло­жительный результат оценивают агглютинацию минимум на 2 креста.

Животных с титром РМА 1:50 у невакцинированных, 1:100 и выше у вакци­нированных оценивают как зараженных или возможных лептоспироносителей. Если в РМА при однократном исследовании реагирует положительно более чем 20% обследованных животных, то хозяйство признают неблагополучным по лептоспирозу. Положительные реакции с антителами Autumnalis, Cynopteri, Bataviae, Pyrogenes, Australis рассматривают как серогрупповые, поскольку лептоспиры указанных серогрупп обычно у сельскохозяйсгвенньк животных не обнаруживаются. Их признают возбудителями только в случае выделения чис­той культуры или положительной РМА.

Возбудителями лептоспироза признаются лептоспиры серогруппы, к ко­торой антитела выявлены в большем титре. При положительной РМА с лептоспирами необычных серогрупп проводят повторное исследование жи­вотных через 10-12 суток в РМА.

В США титр РМА 1:100 рассматривают как основание для подозрения в заболевании животного, 1:200 и более — как положительный результат, 1:800 и более — как показатель активной инфекции.

При получении равных титров сыворотки с лептоспирами нескольких серогрупп или высоких титров к лептоспирам, ранее неизвестным как воз­будители у с/х животных, для выяснения их этиологической роли прибегают к иммуноадсорбционному анализу. Техника иммуно-адсорбционного анализа изложена ранее применительно к серологической идентификации выделенных культур лептоспир. В качестве адсорбента применяют 5-7-суточные культуры, выращенные в жидкой питательной среде, инактивированные 0,3%-ным формалином в течение 10-12 часов, осажденные центрифугированием в течение 30 минут при 10000 об/мин. Осадок ресуспендируют в 0,9 мл физиологического раствора, смешивают с 0,1 мл исследуемой сыворотки, выдерживают 48 часов при 1-5°С, цент­рифугируют, надосадочную жидкость (адсорбированную сыворотку) ис­следуют на наличие антител к штамму-сорбенту, а далее исследуют со все­ми штаммами в РМА, с которыми сыворотка реагировала до адсорбции. Антитела к возбудителю из сыворотки при абсорбции гетерологичными лептоспирами не удаляются.

Питательные среды для культивирования лептоспир. Фосфатные буферные растворы. Маточные растворы: а). КН2Р04 — 9,078 г растворяют в 1000 мл дис­тиллированной воды; б). Na2HP04x 2Н20 — 11,876 г растворяют в 1000 мл дистиллированной воды. Растворы хранят при 2 -4°С до 30 суток. Рабо­чий буферный раствор готовят следующим образом: 79 мл раствора Б сме­шивают с 21 мл раствора А и 900 мл дистиллированной воды. Контролиру­ют рН буфера и в случае необходимости подкисляют однозамещенным фос­форнокислым калием или подщелачивают двузамещенным фосфорнокис­лым натрием до рН 7,2 -7,4. Готовый раствор стерилизуют при 120°С в течение 30 минут.

Водно-сывороточная среда. Разлитый во флаконы фосфатный буферный раствор (рН 7,2 -7,4) автоклавируют при 115°С 30 минут. К охлажденному буферному раствору добавляют 5 -10% инактивированной при 56 -58°С в течение 1 часа сы­воротки крови кролика или барана, фильтруют через фильтр Зейтца и раз­ливают в пробирки. Для проверки на стерильность среду выдерживают при 37° С в течение 3 -5 суток.

Среда Ферворта в модификации W. Wolff. 1). Растворяют 1 г пептона в 1 л дистиллированной воды и кипятят. 2). Добавляют 200 мл раствора Рингера и вновь кипятят. 3). Добавляют 100 мл фосфатного буфера рН 7,2 и кипятят. 4). Добавляют N-раствор фос­форной кислоты (2 мл).
5). После пятиминутного кипячения смеси и охлаж­дения ее фильтруют через бумажный фильтр и вновь кипятят 30 минут. 6). Раз­ливают в пробирки по 3 мл, прогревают пробирки 30 минут при 100°С. 7). Добавляют в каждую пробирку по 0,3 мл кроличьей сыворотки, содержащей небольшую примесь гемоглобина (гемолизированных эритроцитов).

8). Инактивируют 30 минут при 56°С в водяной бане. 9). Проверяют стерильность: выдерживают среду в термостате при 37° С в течение 24 часов.

Полужидкая среда Флетчера. К 1000 мл дистиллированной воды добавляют 2 г агара и кипятят К) минут. Затем разливают по 5 мл в пробирки и автоклавируют при 0,8 атм 30 минут. После охлаждения в каждую пробирку вносят по 0,5 мл стериль­ной сыворотки крови кролика или барана, инактивируют при 56-58° С 30 минут. Проверяют на стерильность в течение 3 -5 суток при 37°С.

Среда Кортхофа. Бидистиллированной воды — 500 мл, пептона Витте — 400 мг, натрия Хлорида — 700 мг, NaHC03 — 10 мг, калия хлорида — 20 мг, кальция хло­рида — 20 мг, КН2Р04 — 90 мг, Na2HP04x 2Н20 — 480 мг. Раствор прогревают 20 минут при 100°С, фильтруют через бумажный фильтр, прогревают в течение 30 минут при 100°С. После охлаждения до­бавляют 8% свежей кроличьей сыворотки. Разливают в пробирки по 8 мл. Прогревают в водяной бане при 56° С в течение 1 часа.

Среда Стюарта. D-аспарагина (М/10) — 2 мл, Н4С1 (М/10) — 10 мл, MgCl2 (М/10) — 4 мл, NaCl (М/10) — 66 мл, глицерина — 1 мл, водного раствора фенола красного (0,02%) — 10 мл, дистиллированной воды — 91 мл. Смесь кипятят 30 минут, добавляют 16 мл фосфатного буфера (рН 7,6) и вновь прогревают при 100°С в течение 1 часа. Охлаждают и добавляют 5- 10% стерильной кроличьей сыворотки. Разливают асептично в пробирки по 4-5 мл в каждую и прогревают в водяной бане при 60°С в течение 1 часа.

Цветная питательная среда для определения ферментации углеводов по А.С. Самедову. К 100 мл дистиллированной воды добавляют 0,7 мг 10% экстракта пекарских дрожжей и раствор стерилизуют в течение 20 минут в автоклаве. Затем к этой смеси добавляют 250 г одного из углеводов и устанавливают рН 7,0-7,2. После этого добавляют 1 мл реактива Андреде. Готовую сре­ду разливают в стерильные бактериологические пробирки по 3-5 мл и вто­рично стерилизуют при 0,5 атм в течение 20 минут. Перед посевом лептос­пир в эту среду добавляют инактивированную кроличью сыворотку из рас­чета 5% к объему среды (рН среды 7,4-7,6). Посевы заливают вазелино­вым маслом. В случае ферментации углеводов среда окрашивается в свет­ло-малиновый цвет.

Плотная среда Кокс. В90 мл дистиллированной воды растворяют 1 г агара Дифко, 0,2 г триптозофосфатного бульона Дифко, автоклавируют, охлаждают до 50°С, до­бавляют 10 мл стерильной сыворотки крови кролика и 1 мл 5 -10%-ного раствора гемоглобина. Раствор гемоглобина готовят путем лизиса одного объема эритроцитов в 20 объемах дистиллированной воды и фильтрования через фильтр Зейтца. В среде устанавливают рН 7,5; прогревают в водяной бане при 56°С 30 минут, разливают ее в чашки Петри.

Среда Канарейкиной С.К. и Черкулан П. В 90 мл дистиллированной воды растворяют 50 мл натрия хлорида, 1 г агара Дифко, 2,4 мл триптического перевара Хоттингера. Смесь кипятят 3-5 минут, добавляют 10 мл фосфатной смеси (см. выше), вновь кипятят, устанавливают рН, автоклавируют при 120°С в течение 15 минут. Далее смесь охлаждают до 50°С, добавляют 10 мл инактивированной кроличьей сыворотки и 5-10% гемоглобина (см. выше).

Среда Еллингаузена и Куллода. Раствор «а»: Н4С1 — 5,35 г, MgCl6KH20 — 3,72 г, NaCl — 38,50 г, ди­стиллированная вода — 1л; раствор «б»: Na2HP04 — 16,6 г, КН2Р04 — 2,172 г, дистиллированная вода — 1 л. К 700 мл дистиллированной воды добавляют 50 мл раствора «а» и 40 мл раствора «б». Затем добавляют L-цистин — 180 мг, ZnSО4 — 3,2 мг, CuSО4 x 5Н2О — 2,4 мг, FeSО4 х 7Н20 — 40 мг. Смесь встряхивают и фильтруют. Вносят витамин В12 — 160 гамм и тиамин-НС1 —160 гамм. Добавляют дис­тиллированной воды до окончательного объема среды (1 л). Затем раствор стерилизуют при 121°С 15 минут. После охлаждения добавляют 20%-ный олеино-альбуминовый комплекс (ОАС) — 1% к объему среды. Он может быть заменен V фракцией бычьего альбумина (1%) и твином-80 (0,1%).

Date: 2016-02-19; view: 502; Нарушение авторских прав; Помощь в написании работы --> СЮДА...



mydocx.ru - 2015-2024 year. (0.007 sec.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав - Пожаловаться на публикацию