Выделение и идентификация культур возбудителей

Культивирование. C.histolyticum — нестрогий анаэроб, C.sordellii — строгий анаэроб. Тем­пературный оптимум 37-38° С. Культивирование других возбудителей зло­качественного отека изложено выше.

Исследуемый материал засевают в среду Кита-Тароцци, глюкозо-кро-вяной агар, МПБ, МПА. Чашки Петри с посевами инкубируют в анаэро-стате. Время культивирования посевов 24-48 часов.

Характер роста возбудителей на питательных средах. Особенности роста на питательных средах С. perfringens, C.novyi, C.chauvoei описаны ранее. C.histolyticum на среде Кита-Тароцци растет с равномерным помут­нением, последующим просветлением среды и образованием осадка, газо­образования нет. На глюкозо-кровяном агаре формирует мелкие, росинча-тые, полусферические с ровным краем, блестящей поверхностью колонии диаметром 0,5-1 мм. С возрастом колонии становятся непрозрачными, се­рыми или белыми, с изрезанными краями. В толще сахарного агара неподвижные штаммы образуют чечевицеобразные колонии. Штаммы, имеющие жгутики, — колонии с уплотненном центром.

C.sordellii на среде Кита-Тароцци в течение 24 часов вызывает силь­ное помутнение и умеренное газообразование, культура имеет неприятный гнилостный запах. По мере старения в среде появляется слизис­тый осадок. На глюкозо-кровяном агаре через 24-48 часов формирует сла­бовыпуклые, серо-белые колонии неправильной формы, с шероховатой по­верхностью, изрезанными краями. Обычно колонии окружены узкой зоной β-гемолиза. В агаре столбиком формирует чечевицеобразные колонии.

Морфология клеток возбудителей в культуре. C.hislolyticum в старых культурах формирует овальные споры, располага­ющиеся центрально или субтерминально («игольное ушко»), перитрих.

C.sordellii в культуре образует овальные центральные или субтерми­нальные споры. В молодых культурах активно подвижен (перитрих).

Идентификация возбудителей по ферментативным свойствам. При обнаружении в первичных посевах на среде Кита-Тароцци бактери­альных клеток с типичными для возбудителей злокачественного отека морфоло­гическими и тинкториальными свойствами из культур делают дробный посев на глюкозо-кровяной агар Цейсслера. В случае выявления типичных клеток возбудителя в колониях на глюкозо-кровяном агаре, в первичных или последу­ющих посевах, из подозрительных колоний отвивают чистую культуру и у суб­культур проверяют ферментативные свойства. Биохимические свойства С. perfringens, C.novyi, C.chauvoei изложены ранее в соответствующих разде­лах. Для C.histolyticum и С.sordellii характерны ферментативные свойства, пред­ставленные в таблице 91. Вирулентные штаммы C.sordellii продуцируют ле­тальный токсин типа А-токсина
С. novyi. Многие штаммы выделяют кислородо-лабильный гемолизин, неидентифицированные протеазы. C.histolyticum на казе­иновых средах вырабатывает летальный и некротический токсин, высокоак­тивную коллагеназу и протеиназу, а также чувствительный к кислороду гемо­лизин. Для определения ферментативных свойств и типа токсина используют методы, указанные ранее (см. «Инфекционная энтеротоксемия»).

Таблица 59 - Ферментативные свойства С. histolyticum и С. sordellii

Биопроба. Проводят для обнаружения возбудителей непосредствешта в исследуемом мате­риале, а также для определения патогенных свойств изолированных культур.

В первом случае в стерильной ступке растирают кусочки исследуемого мате­риала с небольшим количеством МПБ и 0,5-1,0 см³ материала вводят подкож­но морским свинкам в область брюшных мышц. За животными наблюдают в течение 8 суток. В положительном случае животные погибают через 1-2 суток. Погибших морских свинок вскрывают, учитывают характер паталогоанатомических изменений и проводят бактериологическое исследование. Характер паталогоанатомических изменений у морских свинок, зараженных С. novyi, опи­сан ранее. При наличии в материале С. perfringens типов А и D кожа на месте инъекции легко отслаивается от мышц, которые имеют серовато-грязный цвет, кишечник вздут, сосуды кровенаполнены. В случае заражения С. perfringens типов В и С кожа легко отделяется, но мышцы красного цвета, сухие. Кишечник геморрагически воспален, вздут. Заражение C. sordellii приводит к образова­нию на месте инъекции студенистого отека, мышцы бледные. C. histolyticum при заражении редко вызывает гибель животных. Эффективно внутримышечное за­ражение. В этом случае кожа на месте инъекции красно-фиолетовая, мышцы расплавляются (кашицеобразная масса), газа нет.