Завдання 2. Визначення вмісту піровиноградної кислоти в плазмі крові, як показник забезпеченості організму вітаміном В1

Принцип методу. До числа показників вітамінної забезпеченості організму вітаміном В₁ відносяться: вміст вітаміну В₁ в крові та сечі, зміна активності тіамінових ферментів – піруватдегідрогеназного комплексу та транскетолази в крові, вміст піровиноградної кислоти в крові та сечі. При нестачі вітаміну В₁ знижується активність піруватдегідрогеназного комплексу, транскетолази та зростає концентрація піровиноградної кислоти в крові.

Піровиноградна кислота з динітрофенілгідразином утворює гідразон, який в лужному середовищі дає червоно-рожеве забарвлення. Інтенсивність забарвлення є пропорційною концентрації піровиноградної кислоти.

Техніка роботи. Беруть дві пробірки. У першу поміщають 1 мл плазми крові № 1, у другу – 1 мл плазми крові № 2. Після цього в обидві пробірки додають по 1 мл 0,1%-го розчину 2,4-динітрофенілгідразину (ДНФГ), змішують і ставлять на 20 хв. у темне місце. Пізніше додають по 1 мл 10%-го розчину натрію гідроксиду і через 10 хв. фотометрують на ФЕКу проти контролю (дистильована вода) при синьому світлофільтрі.

Дані оптичної щільності, які були отримані на ФЕКу, складали: плазма крові № 1 – 0,4; плазма крові № 2 – 0,9.

По готовому графіку визначають кількість піровиноградної кислоти в плазмі крові в мкмоль/л, що відповідає показникам ФЕК. Коефіцієнт перерахунку оптичної щільності в мкмоль/л плазми крові складає – 132.

Зробити висновки з проведеного експерименту.

Клініко-діагностичне значення. У крові здорової людини вміст піровиноградної кислоти складає 70 – 140 мкмоль/л, із сечею за добу виділяється 15 – 25 мг піровиноградної кислоти. Вміст піровиноградної кислоти (разом з молочною кислотою) збільшується під час посиленої м’язової праці, а також при патологічних процесах, що супроводжуються судомами.

Виділення піровиноградної кислоти з сечею зростає при В₁-вітамінній недостатності, серцевій недостатності, а також після введення адреналіну, стрихніну. До збільшення вмісту піровиноградної кислоти призводять токсична дія ацетилсаліцилової кислоти (аспірин), отруєння ртуттю, арсеном, сурмою.