Методы определения HLA АГ

HLA - I АГ определяют цитотоксическим тестом.

Суспензию лимфоцитов смешивают с сывороткой содержащей АТ к АГ HLA, комплемент с красителем (трипановый синий, эозин). В случае присутствия АГ комплиментарного АТ, то в присутствие комплемента наблюдается повреждение мембран лимфоцитов в связи, с чем изменяется их окраска.

Реакция лейкоаглютинации – склеивание лейкоцитов в конгломераты при влиянии специфических иммунных сывороток.

Установка соответствующего HLA донора и реципиента.

HLA - II тестируются в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ).

Смешивают лимфоциты донора и реципиента, инкубируют 3 – 6 дней, если происходит трансформация примерно 30% лимфоцитов в лимфобласты, результат оценивают, считая, что сила реакции зависит от степени генетической несовместимости донора и реципиента, как результат стимуляции HLA АГ.

Реакцию учитывают с использованием светового микроскопа или радиоиммунным методом. Учитывая по включению ³Н-тимидина в ДНК лимфоцитов.

Результат считается отрицательным, если обнаруживается не более 15% бластных форм лимфоцитов.

Экспресс метод оценки. Считают, что СКЛ – это ответ в фазе иммунного распознавания, но можно считать, что реакция отражает пролиферативную способность лимфоцитов; в т.ч. и лимфоцитарную цитотоксичность – используют в тесте лимфоцитотоксичности.

Оценка цитотоксичности может использоваться и в СКЛ.

Лимфоциты мишени инкубируют с митогеном (в частности ⁵¹Cr) и в эту систему вносятся цитотоксические лимфоциты, меченные радиоактивным стимулятором. Киллерный эффект учитывают по высвобождению метки.

Метод PCR диагностики.

Основан на определении структурных особенностей ДНК, особенно HLA - I и HLA - II.

Часть II:

Прикладная иммунология.