Других родов

Таблица 42 (продолжение)

M. avium. Растет на яичной среде с салицилатом натрия. Первичный рост на плотных средах отмечают на 15-30 сутки (субкультуры на 10-20 сут­ки). В жидких питательных средах растет диффузно, на поверхности среды образуется влажная жирная пленка, на дне сосуда — рыхлый осадок. На плотных средах растет в виде гладкого маслянистого налета. Колонии ок­руглые, слизистые, мягкие, серовото-белые, с возрастом могут желтеть. Мо­гут иметь пуговицеобразное возвышение с кратерообразным углублением.

Идентификация микобактерий на уровне рода. Исследуют отношение к окраске по методу Циля-Нильсена, Грама, мор­фологию клеток, кислотоспиртоустойчивость, отмечают скорость роста (по­явление макроскопических видимых колоний), чувствительность к пеницил­лину, образование фермента арилсульфатазы, что позволяет дифференциро­вать микобактерий от коринебактерий, нокардий, родококков (табл. 43).

Идентификация основных патогенных видов микобактерий по культуральным и ферментативным свойствам. В лабораториях РФ культуры микобактерий выращивают на яичных сре­дах, яичных средах с салицилатом натрия (Среда содержит 1000 мкг/мл салицилата натрия) и МПБ при трех температурных режимах (20-25° С; 37-38° С; 45° С), по две пробирки на каждый режим. Культуры микобактерий, растущие на яичной среде с салицилатом натрия или МПБ, образующие пигмент, растущие при 22° С дальнейшему исследованию не подвергают. Остальные культуры исследуют в биопробе. В случае необхо­димости выделенные культуры микобактерий изучают более детально.

При дифференциации возбудителей туберкулеза от сапрофитных мико­бактерий принимают во внимание, что последние имеют более толстые, гру­бые, неравномерно окрашивающиеся клетки, а также, в отличие от патоген­ных микобактерий, после окрашивания по методу Циля-Нильсена обесцве­чиваются гипохлоритом (гипохлоритный метод: раствор гипохлорита 0,01%) имеют формамидазу (формамидазный метод). В случае использования гипохлоритного метода мазки, углекислого калия. Через 6-8 часов оба раствора объединяют, фильтруют через бумагу и осадок растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

У выделенных культур исследуют скорость, тип роста и форму коло­ний в средах, содержащих глицерин, образование пигмента, верхний тем­пературный предел роста, синтез ниацина, ингибицию роста ТСН, голу­бым толуидиновым, редукцию нитратов, образование уреазы, пирозинамидазы, зависимость роста от натрия пирувата и др. (табл. 42, 43).

Методики постановки некоторых дифференциальных тестов изложены ниже. Для проведения ниацинового теста используют чистую культуру, выращенную на среде Левенштейна-Иенсена. Бактериальную массу зали­вают 1-2 мл дистиллированной воды и пробирки помещают в наклонном положении на 20-30 минут. Затем смешивают 1 мл экстракта, 1 мл 10%-ного раствора BrCN и 1 мл спиртового анилинового раствора. Положитель­ный результат — интенсивное желтое окрашивание в течение 5 минут. Мо­гут быть использованы коммерческие ниациновые тест-бумажки (Difco).

Редукция нитратов. В пробирку помещают несколько капель стериль­ной дистиллированной воды и петлю молодой культуры микобактерий. В качестве контроля берут пробирку без микобактерий. Добавляют 2 мл ра­створа NaN0₃ (0,01 М раствор NaN0₃ в 0,022 M фосфатном буфере, рН 7,0). Встряхивают и выдерживают в водяной бане при 37° С в течение 2 часов. Затем добавляют одну каплю разведенной 1:2 концентрированной НС1, две капли 0,2%>-ного водного раствора сульфаниловои кислоты, две капли 0,1%о-ного водного N — (1-нафтил) этилендиамин дигидрохлорида. Положительный результат — окрашивание от розового до красного цвета.

Таблица 43 - Дифференциация основных патогенных видов