Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
|
Некоторых других видов рода
Таблица 39 (продолжение)
Виды В. megaterium и В. mesentericus объединены в один вид — В. megaterium; В, anthracoides и
Идентификация В. anthracis при помощи сибиреязвенного бактериофага (К-ВИЭВ, Гамма MB A, Fah - ВНИИВМ). Используют для идентификации выделенных чистых культур возбудителя или непосредственно в первичных посевах. В первом случае испытуемую культуру концентрацией 125-500 млн м.к./мл засевают на шесть пробирок со скошенным МПА (без конденсата) равномерно по всей поверхности среды, выдерживают посевы 15 минут при 37° С. Далее в 4 пробирки вносят по одной капле неразведенного фага и ставят их в штатив до стекания капель. В две пробирки фаг не вносят (контроль). Исследование можно проводить в чашках Петри с предварительно подсушенным агаром, разделенным по три квадрата в трех горизонтальных полосах. На три квадрата наносят исследуемую культуру (материал) бактериологической петлей, подсушивают пять минут. Затем на два квадрата наносят неразведенный бактериофаг, третий служит контролем. Посевы инкубируют при 37°С 6-18 часов. Для идентификации возбудителя в первичных посевах аналогичным способом на МПА засевают исследуемый материал и далее поступают, как описано выше. Учет результатов проводят через 6-8 и 12-18 часов. В контроле должен быть сплошной рост культуры по всей поверхности среды. Положительным результатом является стерильная «дорожка» по ходу стекания капли фага или отсутствие роста в квадрате с фагом.
Обнаружение антигенов В. anthracis в патологическом материале при помощи реакции преципитации. Только в РП исследуют загнивший материал. Если доставленное ухо обескровленно, исследуют и свежий материал. Свежий тканевый материал перед исследованием выдерживают 18-20 часов в термостате, несвежий исследуют сразу. Способы экстрагирования растворимых антигенов В. anthracis. ируют при 20°С в течение 16—Горячий способ. 1-2 грамма ткани заливают в соотношении 1:10 0,9%-нымраствором натрия хлорида и кипятят в водяной бане 30-40 минут. Холодный способ. 1-2 грамма материала растирают в ступке с песком, заливают фенолизированным (0,3% фенола) физиологическим раствором в соотношении 1:10 и экстрагируют при 20°С в течение 16-18 часов. Экстракты фильтруют через асбестовую вату и исследуют как антиген в реакции кольцепреципитации методом наслаивания или подслаивания. Метод наслаивания. В уленгутовскую пробирку вносят 0,2-0,3 мл преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем осторожно наслаивают экстракт, чтобы оба компонента не перемешались. Метод подслаивания. В уленгутовскую пробирку вносят 0,2-0,3 мл исследуемого экстракта. Под него при помощи пастеровской пипетки подслаивают равный объем иммунной сыворотки. Контроль: аналогичным образом ставят РП с преципитирующей сывороткой и стандартном сибиреязвенным антигеном. Положительный результат — наличие беловатого тонкого диска преципитации на границе компонентов в опыте и контроле через 1-2 минуты, но не позднее 15. Положительный результат РП является достаточным основанием для положительного диагноза на сибирскую язву. Обнаружение антигенов В. anthracis в кожевенно-меховом сырье проводят в соответствии с «Наставлением по исследованию кожевенного и мехового сырья на сибирскую язву реакцией преципитации».
Питательные среды. Среда ГКИ. К раствору Хенкса добавляют 40% (объем/объем) стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота, инактивированной при 56°С 30 минут. Раствор Хенкса можно заменить бульоном Хоттингера (рН 7,2-7,4). Среду используют для обнаружения способности капсулообразования у В. anthracis. Среда Томова. В состав среды входят: 50 мл пептонного агара (10%-ный раствор агара, 2,5%-ный раствор пептона, 0,5%-ный раствор натрия хлорида), 100 мл сыворотки крови крупного рогатого скота, 50 мл куриного белка, 25 мл 0,4% гемина в 0,01 N растворе натрия гидроксида, 25 мл 0,01 N уксусной кислоты. В стерильной колбе смешивают сыворотку крови, белок подогревают до 50°С и добавляют к расплавленному пептонному агару, имеющему температуру 50°С. Затем добавляют раствор гемина, уксусную кислоту, компоненты перемешивают и стерильно разливают в чашки Петри. На данной среде возбудитель сибирской язвы растет в Среда обладает селективными свойствами: растут В. anthracis, В. cereus; не растут В. subtilis, B.megaterium, В. brevis, В. mycoides. Среда Kniesely. К расплавленному питательному агару добавляют Другие виды бацилл на этой среде обычно не растут. ЭДТА и ацетат таллия можно вносить в среду до автоклавирования. Лизоцимовая среда. Первоначально готовят раствор лизоцима, содержащий 10000 ЕД в дистиллированной воде, стерилизуют фильтрацией.
Дифференциально-диагностическая среда с фенолфталеинфосфатом натрия. К 100 мл питательного агара, расплавленного и имеющего температуру 45-50° С, добавляют следующие растворы: 0,5 мл полимиксина М сульфата, 0,5 мл невиграмона, 10 мл гризеофульвина, 10 мл моющего средства «Прогресс», 0,1 мл натрия фенолфталеинфосфата. Компоненты перемешивают, разливают в чашки Петри. Среда пригодна 1-2 сут. при хранении в условиях холодильника. Через 18-24 ч культивирования посевов в крышку чашки Петри вносят 1-2 мл 25%-ного водного раствора аммиака. Чашку выдерживают (крышкой вниз) при 20° С 1 минуту и учитывают результат. Колонии бактерий с фосфатазной активностью розовеют, остальные колонии, в том числе В. anthracis, остаются бесцветными. Среда обладает селективными свойствами. Приготовление растворов. Полимиксина М сульфат растворяют в физиологическом растворе из расчета 10000 ЕД/мл, невиграмон растворяют в 25%-ном водном растворе аммиака, затем разводят стерильным 0,9%-ным раствором натрия хлорида до концентрации 100 мкг/мл. Моющее средство «Прогресс» разводят стерильной дистиллированной водой до концентрации 0,1%. Гризеофульвин растирают в ступке, растворяют в стерильной дистиллированной воде до концентрации 100 мкг/мл. Натрия фенолфталеинфосфат (коммерческий 10%-ный раствор) прогревают на водяной бане при 56° С 30 минут. Среду используют для выделения из загрязненного материала возбудителя сибирской язвы.
Таблица 40 - Получение необходимой концентрации пенициллина
Среда Буза. К 3%-ному голодному (без пептона) агару (рН 7,2-7,4) добавляют 15% дефибринированной крови барана. Используют для культивирования возбудителя сибирской язвы. Приготовление системы для диск-преципитации. Стандартную преципитирующую сыворотку разливают по 0,5- 1 мл в стерильные бактериологические пробирки. Осторожно, во избежание перемешивания, при помощи пастеровской пипетки по стенке пробирки наслаивают 1%-ный агаровый гель (температура 45-50° С) до получения столбика высотой 5-7 мм. После застывания агара на его поверхность наливают 1-1,5 мл жидкой питательной среды (среда ГКИ, бульон Хот-тингера с сывороткой крови). Систему используют в день приготовления. Агаровый гель (1%-ный, рН 7,0) готовят из агара «Дифко» или обычного агар-агара путем его очистки. В последнем случае 5 г агар-агара помещают в 300 мл дистиллированной воды (рН 7,0), растворяют в кипящей водяной бане. В расплавленный агар добавляют 0,5 г СаС12х6Н20, после растворения охлаждают агар до 50° С, добавляют 100 мл водного раствора куриного яичного белка и вновь нагревают в кипящей водяной бане 15-20 минут. Если в течение этого времени яичный белок плохо свертывается, то добавляют еще 0,25-0,5 г хлористого кальция и нагревают раствор до появления хлопьев осадка. Затем горячий агар фильтруют через смоченный в дистиллированной воде и отжатый ватный фильтр. К профильтрованному агару вновь добавляют раствор яичного белка и всю процедуру повторяют. Готовый агаровый гель разливают в пробирки (колбы) и стерилизуют при 0,5 атм в течение 20 минут. Гель пригоден для использования в течение 6 месяцев (хранение при 2-4° С). Приготовление питательного агара для постановки теста «жемчужного ожерелья». Стерильный МПА разливают в 3 пробирки по 10 мл или в 3 колбы по 100 мл. В две пробирки (колбы) с расплавленным и охлажденным до 45-50°С агаром стерильно вносят пенициллин до концентрации 0,5 и 0,05 ЕД/мл. Третья пробирка является контрольной. Растворы пенициллина на МПБ готовят согласно таблице 40.
|