Лабораторная диагностика сибирской язвы

Сибирская язва (Anthrax) — остропротекающая болезнь, характеризующая­ся признаками септицемии, интоксикации, образованием карбункулов. К си­бирской язве восприимчивы крупный рогатый скот, лошади, другие одноко­пытные, верблюды, олени, дикие травоядные всех видов. Менее чувстви­тельны свиньи, плотоядные — малочувствительны.

Возбудителем болезни является грамположительная, спорообразующая палочковидная бактерия — Bacillus anthracis, род Bacillus.

Лабораторная диагностика основана на выделении и идентификации культуры возбуди­теля, в случае необходимости проводят обнаружение антигенов возбудите­ля в исследуемом материале.

Бактериологическое исследование. Материал для исследования. Прижизненно у больного животного берут кровь (обычно из уха). Капли крови наносят в виде толстого мазка на предметные стекла, подсушивают, стекла складывают мазками внутрь, помещают между ними спички. От трупа животного берут ухо или мазок крови из сосудов уха. От трупов свиней — участки отечной соединительной тка­ни, заглоточные, подчелюстные и другие лимфатические узлы, при нали­чии в них изменений. Ухо отрезают со стороны, на которой лежит труп, предварительно перевязав двумя лигатурами, между которыми делают раз­рез. Место отреза прижигают. Если подозрение возникло в ходе вскрытия трупа (кроме трупов свиней), вскрытие прекращают, для исследования бе­рут кусочки селезенки, печени, измененные лимфатические узлы. Матери­ал помещают в стеклянную посуду (банки, пробирки). Мазки после высу­шивания кладут в чашки Петри, последние завертывают в бумагу, на ней делают надпись «Мазок нефиксирован!». Посуду с материалом помещают во влагонепроницаемую тару, опечатывают и нарочным с соответствую­щим сопроводительным документом направляют в лабораторию. Для обнаружения возбудителя сибирской язвы в сырье животного происхождения и объектах внешней среды отбор матери­ала и ход бактериологического исследования регламентирован соответ­ствующими методическими указаниями.

Микроскопическое исследование исходного материала. Проводят путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму, а также од­ним из методов на капсулу: метиленовым синим Леффлера, по Романовско­му - Гимза, Михину, Ольту, Ребигеру. Учитывая опасность исследуемого материала для бактериолога, рекомендуется фиксировать мазки этиловым спиртом с перекисью водорода, что обеспечивает инактивацию возбудите­ля. С этой целью подсушенные на воздухе мазки выдерживают 30 минут в фиксирующей жидкости: 180 мл этанола 96° и 20 мл 30%-ного пергидроля.

Возбудитель в мазках, окрашенных по Граму, представляет крупную грамположительную палочку (5-10 х 1-2 мкм) с закругленными концами (одиночные клетки). В материале клетки располагаются преиму­щественно в виде коротких цепочек, попарно. Концы клеток, обращенные друг к другу, имеют обрезанные под прямым углом концы. В материале от свиней форма клеток может быть атипичной: короткие, толстые или изогну­тые палочки, иногда зернистые со вздутием на конце или середине клетки. В несвежем материале лизис клеток может привести к обнаружению в маз­ках «теней микробов», представляющих более устойчивые к гниению кап­сулы возбудителя. В препаратах, окрашенных специальными методами, клетки окружены капсулой, у парных клеток и в коротких цепочках она общая для нескольких клеток. При окраске метиленовым синим Леффлера клетки синего цвета окружены розовым капсулярным материалом, что счи­тается характерным для B.anthracis. В мазке, окрашенном по методу Гимзы, капсулы бледномалинового цвета.

В организме животного, в невскрытых трупах возбудитель споры не образует, для их формирования необходимы: доступ кислорода, темпера­тура 26-30° С, нейтральная или слабощелочная реакция окружающей среды.

В мазках из материала при микроскопическом исследовании могут быть обнаружены клетки морфологически сходных бактерий, например — C.perfringens (крупные, грамположительные, капсулообразующие).

Клетки В. anthracis могут быть дифференцированы от C.perfringens ок­раской препаратов по Романовскому. При этом капсула В. anthracis имеет почти прямоугольную форму, четкий контур, красно-лиловый цвет, а капсу­ла С. perfringens имеет овальную форму и голубой цвет.

При наличии сибиреязвенных люминесцирующих сывороток препара­ты окрашивают ими в прямом варианте МФА. Имеющиеся люминесцент­ные сыворотки дают перекрестные реакции с В. cereus. Обнаружение в маз­ках светящихся клеток позволяет подозревать наличие в материале возбу­дителя сибирской язвы.