Экспериментальные химеры

Методы маркирования клеток и их применение

Введение

Методы маркирования клеток используются для решения двух типов:

1) когда необходимо выяснить вклад той или иной клеточной линии в формирование органов или тканей (нормальное и анормальное развитие);

2) когда в клетках экспрессируется мутантный ген: свойственна ли высокая или низкая частота возникновения опухолей клеткам-мишеням, или она является результатом действия модифицирующего фактора другой ткани?

Свойства идеального клеточного маркера:

1) клеточная автономность;

2) отсутствие влияния на поведение маркированных клеток;

3) устойчивая экспрессия во всех клетках;

4) техническая легкость выявления.

НО! Большинство методик маркирования не эффективны на 100%!!!

Экспериментальные системы, обеспечивающие получение популяций дифференциально-маркированных клеток:

1) экспериментальные химеры;

2) Х-инактивационные мозаики;

3) Индивидуальные клетки, маркированные инъекцией специфического соединения;

4) Клеточные популяции, маркированные за счет интеграции клонированных генов в некоторых клетках ранних эмбрионов;

5) Маркеры, индуцированные мутацией соматической клетки.

Экспериментальные химеры

Химеры – животные, в состав которых входят клетки, происходящие более чем из одной зиготы. Обычно создаются путем комбинирования клеток двух или более предимплантационных эмбрионов или введением в постимплантационные эмбрионы или взрослый организм клеток иного генетического происхождения.

1) Эмбриональные агрегационные химеры: 4-8 клеточные эмбрионы от мышей разных линий агрегируют в условиях культуры. После этого химерный эмбрион переносят в матку.

2) Химеры, полученные инъекцией в бластоцисту. Не требует удаления блестящей оболочки, не возникает препятствия для имплантации при некоторых межвидовых комбинациях.

Клеточные маркеры в химерных системах подразделяются на 2 типа:

· дающие информацию о топографии (пигменты, полиморфизм веществ, маркеры клеточной поверхности, морфологические маркеры, специфические генерации клеток, специфические различия в ДНК);

· не дающие информации о топографии (Полиморфизм, выявляемый с помощью электрофореза, хромосомные маркеры, другие).