Завдання №2. Вивчення перетравлювальної здатності фагоцитів. 1. До пробірок №1 та №2 вносять 0,2 мл антикоагулянту(0,2 мл 2% розчину натрію лимоннокислого або 0,2 мл гепарину в концентрації 50 од/мл)

1. До пробірок №1 та №2 вносять 0,2 мл антикоагулянту(0,2 мл 2% розчину натрію лимоннокислого або 0,2 мл гепарину в концентрації 50 од/мл).

2. До пробірки №1 з антикоагулянтом вносять 0,1 мл крові, 0,2 мл середовища 199 і 0,1 мл 0,1% розчину нітросинього тетразолію (спонтанний НСТ-тест).

3. До пробірки №2 з антикоагулянтом вносять 0,1 мл крові, 0,2 мл середовища 199 і 0,1 мл 0,1 зависини E. coli знешкодженої нагріванням (1 млрд кл/мл) (стимульований НСТ-тест).

4. Проби ретельно перемішують.

5. Проби інкубують у термостаті за 37ºС упродовж 30 хв.

6. Після закінчення інкубування до пробірки №1 додають 3,0 мл дистильованої води для гемолізу еритроцитів. Добре перемішують.

7. Після закінчення інкубування до пробірки №2 додають 0,2 мл 5% розчину формаліну. Ретельно перемішують. Пробу залишають на 10 – 15 хв за кімнатної температури. Через 15 хв додають 3,0 мл дистильованої води. Пробу добре струшують.

8. Проби центрифугують при 1500 об/хв упродовж 5 – 7 хв.

9. Надосадову рідину зливають, до осаду додають 0,1 мл фіз. розчину і вміст пробірки виливають на знежирене предметне скло.

10. Мазок підсушують на повітрі і залишають до наступного заняття.

11. Оформити протокол заняття, зробити висновки.

Контрольні запитання:

1. Які клітини крові належать до фагоцитувальних клітин?

2. Які Вам відомі механізми оксигензалежного та оксигеннезалежного знищення мікроорганізмів?

3. Охарактеризуйте основні етапи фагоцитозу.

4. Для яких імунологічних досліджень використовується НСТ-тест?

Література:

1. Вершигора А.Ю., Пастер Є.У., Колибо Д.В., Позур В.К., Віхоть М.Є, Михальський Л.О., Швець Ю.В., Холодна Л.С., Моложава О.С. Імунологія. – К.: Вища шк., 2005. – 599 с.

2. Ярилин А.А. Основы иммунологии. – М.: Медицина, 1999. – 608 с.

3. Маянский А.Н. Лекции по иммунологии. – Нижний Новгород: изд-во Нижегородской государственной медицинской академии, 2003. – 272 с.

4. Беркало Л.В., Бобович О.В., Боброва Н.О. та ін. Методи клінічних та експериментальних досліджень в медицині. – Полтава: Полімет, 2003. – С.66 – 68.

5. К.Г.Гаркава. Методи імунологічних досліджень: Конспект лекцій для студ. напряму підготовки 0929 «Біотехнологія» денної та заочної форми навчання. – К.: НУХТ, 2009. – 53 с. (Шифр 7363).