Забор крови и оценка результатов серологических исследований при различных инфекционных заболеваниях

Сущность серологических методов исследования состоит в определении роста титра антител в сыворотке крови больного по отношению к известному антигену, вводимому в серологическую реакцию. В клинической практике чаще всего используется РА (Видаля) и ее разновидности, РНГА или РПГА, РСК. Забор крови для серологического исследования выполняется так же, как и при посеве, но в отличие от последнего его лучше осуществлять самотеком, а не шприцем. Для этого берут иглу с более широким просветом и вводят в локтевую вену без шприца. В пробирку собирают 3-5 мл крови. При таком сборе эритроциты меньше травмируются и сыворотка крови реже бывает с явлениями гемолиза. После отстаивания и центрифугирования крови сыворотку с помощью пипетки переносят в другую пробирку или эпиндорф и хранят в холодильнике при т-ре +4⁰С до постановки реакции.

Поскольку иммунный ответ при большинстве инфекционных заболеваний развивается примерно с 7 дня заболевания, а максимальное нарастание титра антител происходит лишь в периоде реконвалесценции, серологические реакции менее пригодны для ранней диагностики и используются главным образом в целях ретроспективной расшифровки этиологии заболевания. Однако кровь для серологических реакций берется и в первые дни, что в дальнейшем дает возможность наблюдать за нарастанием титра антител в динамике заболевания. Повторные серологические реакции берутся не раньше, чем через 5-7 дней. При вирусных заболеваниях берутся «парные сыворотки» с интервалом 10-12 дней и при нарастании титра антител в 4 раза подтверждается диагноз данного заболевания.

Реакции агглютинации основаны на применении корпускулярного антигена, взаимодействующего со специфическими антителами, в результате чего образующийся комплекс антиген-антитело выпадает в виде осадка. Эти реакции используются для серологической диагностики бактериальных инфекций. Принцип РА заключается в добавлении стандартной взвеси бактерий (живой или инактивированной) культуры к серийным разведениям испытуемой сыворотки в пробирках или лунках планшета. РА применяют для диагностики бруцеллеза (реакция Райта, реакция Хеддльсона), туляремии, лептоспироза (РАЛ – реакция лизиса лептоспир), сыпного тифа (РАР – реакция агглютинации риккетсий), шигеллеза, иерсиниоза и псевдотуберкулеза.

Реакция непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА или РПГА). Для постановки этой реакции используют эритроциты животных (барана, обезьяны, морской свинки), сенсибилизированных антителами или антигеном. Реакцию гемагглютинации применяют для диагностики бактериальных (брюшной тиф, паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера) и вирусных (грипп, аденовирусные, корь и др.) и расценивают как экспресс-метод диагностики инфекционных болезней. По специфичности и чувствительности РНГА превосходит РА.

Иммуноферментный анализ (ИФА) применяют для выявления антигена в материале от больного или антител в сыворотке крови с определением их принадлежности к иммуноглобулинам различных классов (IgG и IgM). ИФА применяют для диагностики инфекционных болезней бактериальной, грибковой этиологии, протозойных инфекций и гельминтозов, особенно вирусных инфекций, в частности гепатитов В, С, D, ВИЧ-инфекции, герпесвирусной, ротавирусной, аденовирусной и др. В диагностике ВИЧ-инфекции ИФА имеет значение скринингового исследования для выявления суммарных антител к антигенам ВИЧ, положительный результат которого требует подтверждения методом иммунного блоттинга.