Методическое пособие для самоподготовки студентов

1. Количественные методы определения глюкозы.

Исследуемый материал. Глюкозу определяют в: плазме, сыворотке, цельной крови или депротеинизированных образцах цельной крови, сыворотки крови или плазмы крови, моче, ликворе. Концентрация глюкозы в цельной крови приблизительно на 12-15% ниже по сравнению с плазмой из-за более высокого содержания воды в плазме. Концентрация глюкозы в капиллярной крови натощак приблизительно на 0,11-0,27 ммоль/л выше, чем концентрация глюкозы в венозной крови. Стабилизация образцов крови. Концентрация глюкозы в сыворотке или плазме, отделенной от клеток крови, не меняется в течение 3 дней при температуре от 2 до 8^оС. Для стабилизации уровня глюкозы в цельной крови используют фторид натрия (NaF), оксалат или йодацетат натрия в качестве ингибиторов гликолиза (при хранении цельной крови при комнатной температуре эритроциты и лейкоцитах продолжают использовать глюкозу в гликолизе, что приводит к понижению глюкозы в сыворотке крови на 5-7% за час, поэтому использование ингибиторов гликолиза необходимо). Количественное определение глюкозы в моче производят только в тех порциях, в которых она была обнаружена качественными методами. Унифицированы способы количественного определения глюкозы в моче по цветной реакции с ортотолуидином и глюкозооксидазный метод. В настоящее время для определения глюкозы в сыворотке крови, моче и ликворе глюкозооксидазным методом используют коммерческие наборы реагентов (например, «Фотоглюкоза»).

1.1. Феррициадный метод (метод Хагедорна-Йенсена), основанный на редуцирующих свойствах глюкозы. Принцип метода: в щелочной среде при температуре кипения в присутствии глюкозы феррицианид калия K₃Fe(CN)₆ восстанавливается в ферроцианид калия K₄Fe(CN)₆. О количестве глюкозы в исследуемом образце судят по остатку феррицианида калия, который определяют йодометрическим титрованием. Специфичность метода невелика: наличие креатинина и мочевой кислоты приводит к завышенному результату.
1.2. Ортотолуидиновый колориметрический метод. Принцип метода: о-толуидин реагирует с глюкозой в кислой среде, он конденсируется с альдегидной группой глюкозы, образует равновесную смесь из глюкозамина и шиффова основания; дальнейшие перегуппировки приводят к образованию смеси хромогенов сине-зеленого цвета с максимумом поглощения при 630 н. о- толуидин + глюкоза → окрашенный комплекс