Реакция преципитации (РП), механизм и методы постановки (кольцепреципитация и преципитация в геле). Ингридиенты и их получение. Применение РП.

РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ (РП) -это осаждение растворимого антигена при действии антител в присутствии электролита.

Видимый эффект реакции - феномен преципитации – помутнение; образование мутного кольца или осадка - преципитата.

РП применяют для обнаружения неизвестного антигена (сероидентификации) при ряде инфекционных заболеваний:

• при сибирской язве, туляремии, менингите, оспе.

• В судебной медицине ее используют для определения видовой принадлежности крови, спермы;

• в санитарно-гигиенических исследованиях - для установления фальсификации пищевых продуктов.

Компоненты реакции:

1. Антиген (преципитиноген) - это антиген молекулярной природы, находящийся в мелкодисперсном (растворимом) состоянии.

2. Антитела (преципитины) находятся в сыворотке крови человека или в иммунных диагностических преципитирующих сыворотках, которые содержат известные антитела.

3. Электролит - изотонический раствор хлорида натрия.

Получение преципитиногена - измельчение материала и извлечение из него белковых антигенов кипячением или другими способами.

Примеры преципитиногенов: лизаты или экстракты различных органов и тканей, чужеродная сыворотка крови (сыворотка - это раствор, в первую очередь, различных белков), фильтраты бульонных культур микробов, солевые экстракты микробов, аутолилизаты и др

Преципитирующие диагностические сыворотки получают путем гипериммунизации кроликов соответствующими преципитиногенами.

Примеры преципитирующих сывороток:

• преципитирующая сибиреязвенная сыворотка (содержит антитела к антигенам возбудителя сибирской язвы),

• преципитирующая противоменингококковая сыворотка (содержит антитела против антигенов возбудителя менингита) и др.

Титр преципитирующей сыворотки - это наибольшее разведение преципитиногена, при котором сыворотка еще дает реакцию преципитации.

Способы постановки РП:
1. Реакция кольцепреципитации

Реакциятермокольцепреципитации

Если в качестве антигенов в реакции кольцепреципитации используют прокипяченные и профильтрованные водные экстракты органов или тканей, то реакция носит название реакции термокольцепреципитации (реакция Асколи). Эта реакция используется при диагностике сибирской язвы.

Реакция преципитации в геле

Различают 2 метода РП в геле:

а ) метод простой (радиальной) иммунодиффузии: один из компонентов реакции иммунитета (антиген или антитело) помещают в лунку, а другой компонент - смешивают с агаровым гелем; при положительном результате (антиген соответствует антителу) вокруг лунки образуется кольцо преципитата;

б) метод двойной иммунодиффузии: и антитело и антиген помещают в отдельные лунки, они диффундируют в агаровом геле навстречу друг другу; при положительном результате на месте встрече антитела и антигена образуются линии преципитации.

Иммуноэлектрофорез -смесь антигенов разделяется в геле с помощью электрофореза, затем в канавку параллельно вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с антигеном линии преципитации.