Указания к лабораторной работе №12

Тема: a-Аминокислоты. Пептиды. Белки.

Опыт №1. Реакции на серосодержащие аминокислоты.

Ход исследования: К 5 каплям исследуемого раствора (раствор белка) добавляют 5 капель 30% раствора гидроксида натрия NаОН и 1 каплю 5% раствора ацетата свинца Рb(СН₃СОО)₂. При нагревании жидкость в пробирке постепенно темнеет и выпадает черный осадок сульфида свинца PbS.

ХИМИЗМ:

а) Рb(СН₃СОО)₂ + 2 NаОН ® Nа₂РвО₂ + 2 СН₃СООН

плюмбит натрия

в)

цистеин серин

г) Nа₂РвО₂ + Nа₂S + 2Н₂О ® РвS ¯ + 4 NаОН

сульфид свинца

Сделайте вывод о проделанной работе.

Опыт№2. Ксантопротеиновая реакция.

Ход исследования: К 5 каплям исследуемого раствора белка прибавить 3 капли концентрированной азотной кислоты и осторожно нагреть. Осадок белка, образующийся после добавления кислоты, медленно растворяется и жидкость в пробирке окрашивается в желтый цвет. После охлаждения раствора в пробирку осторожно добавляют 5 капель концентрированного раствора аммиака или 30% раствора едкого натра NаОН. Желтая окраска переходит в оранжевую.

ХИМИЗМ: Входящие в состав тирозина и триптофана бензольные кольца при нагревании с азотистой кислотой подвергаются нитрованию, образуя нитросоединения желтого цвета. При добавлении щелочи нитропроизводные циклических аминокислот превращаются в оранжевые соли хиноидной структуры. Так, например, тирозин при нитровании переходит в нитротирозин, из которого при действии аммиака образуется аммонийная соль, имеющая хиноидную группировку. В отличие от тирозина и триптофана бензольное кольцо фенилаланина подвергается нитрованию с большим трудом.

Опыт №3. Биуретовая реакция.

Данная реакция является общей реакцией на белки, она указывает на наличие в молекуле белка пептидных связей. Биуретовую реакцию также дают некоторые небелковые вещества, имеющие в своей молекуле не менее двух пептидных связей.

Ход исследования: В пробирку к 5 каплям 1% раствора белка добавляют 3 капли 10% раствора едкого натра и 1 каплю 1% раствора сернокислой меди. После взбалтывания содержимое окрашивается в фиолетовый цвет.

ХИМИЗМ: В щелочной среде находящиеся в белке пептидные связи реагируют с сернокислой медью и образуют окрашенные медные солеобразные комплексы. Окраска этих комплексов, а, следовательно, и жидкости, зависит от количества пептидных связей. Комплексы дают фиолетово-розовую окраску. Сделайте вывод о проделанной работе.

Опыт№4. Обнаружение водородных связей в белках.

В две пробирки вносят по 10 капель 1% раствора белка. Одну из пробирок помещают в водяную баню при температуре 70 ⁰С. Нагретый раствор белка сильно опалесциирует (но не выпадает в осадок). Усиление опалесценции произошло из-за того, что под влиянием нагревания водородные связи в белковых молекулах разрушились. Изменилась третичная и вторичная структура белка.

6. Литература:

1. Лекционные записи

2. Н.А. Тюкавкина, Ю.П. Бауков. Биоорганическая химия. М., 1991, с. 313-376

3. Н.А. Тюкавкина. Руководство к лабораторным занятиям по биоорганической химии; М., 1985. с.180-198

4. П.А. Верболович. Практикум по органической, физической и коллоидной химии. 1973., раб. 201 (1), 204, 205 (1), 207, 212.

7. Контроль:

1. Напишите уравнение реакции взаимодействия a-аланина с гидроксидом натрия.

2. Напишите уравнение реакции взаимодействия a-аланина с хлороводородной кислотой.

3. Какие дипептиды можно получить из метионина и гистидина? Напишите их формулы и назовите.

4.Укажите в какой области значений рН находится изоэлектрическая точка трипептида Лей-Глу-Вал.