Определение гемоглобина крови гемиглобинцианидным методом

Оснащение: дезраствор, средства индивидуальной защиты, ФЭК, «Микролаб-540», дозаторы на 0,02 мл и на 5 мл, пробирки, мерная колба на 1 л, исследуемый материал, бланки общего анализа крови.

Реактивы: Трансформирующий раствор: ацетонциангидрин — 0,5 мл, калий железосинеродистый (красная кровяная соль) — 200 мг, натрий двууглекислый (бикарбонат натрия) — 1 г, дистиллированная вода — до 1 л. Стабилен при хранении в посуде из темного стекла при комнатной температуре в течение нескольких месяцев.

Калибровочный раствор гемиглобинцианида. В качестве калибровочного раствора могут применяться стандартные растворы гемиглобинцианида или сухие навески гемоглобина. В последнем случае калибровочный раствор готовят по инструкции.

В настоящее время клинико-диагностические лаборатории для определения концентрации гемоглобина пользуются готовыми наборами реагентов.

Алгоритм действий:

Вариант 1: измерение на ФЭКе

1. В сухие чистые пробирки отмерить 5,0 мл трансформирующего раствора. Опытная и холостая пробы.

2. Внести в опытную пробирку с трансформирующим раствором 0,02 мл крови.

3. Содержимое опытной пробы тщательно перемешать.

4. Оставить стоять при комнатной температуре 10 минут.

5. Произвести измерение на ФЭКе, при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы.

6. Измерить стандартный раствор, при тех же условиях.

7. Расчет содержания гемоглобина произвести по формуле

Hb = Eопх С х К х 0.01 (г/л)

Eст

где, Еоп — экстинкция опытной пробы, Ест — экстинкция стандартного раствора, С — концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе, К — коэффициент разведения крови (251), 0,01 — коэффициент пересчета мг % в г/л.

8. Полученный результат занести в бланк исследования.

Вариант 2: измерение на «Микролаб-540»

1. В сухие чистые пробирки отмерить 5,0 мл трансформирущего раствора. Опытная и холостая пробы.

2. Внести в опытную пробирку с трансформирующим раствором 0,02 мл крови.

3. Содержимое опытной пробы тщательно перемешать

4. Оставить стоять при комнатной температуре 10 минут.

5. Включить прибор.

6. Выбрать нужное измерение.

7. Произвести измерение холостой пробы.

8. Произвести измерение опытной пробы.

9. Полученный результат занести в бланк исследования.