Визначення вмісту гемоглобіну гемоглобінціанідним методом

Принцип методу. Гемоглобін при взаємодії з ціаністим калієм (червона кров’яна сіль) окиснюється у метгемоглобін, що утворює з ацетонціангідрином кольоровий гемоглобінціанід, інтенсивність забарвлення якого пропорціональна концентрації гемоглобіну.

Обладнання: фотоелектроколориметр.

Посуд: піпетки мірні на 0,02 мл і 5 мл; пробірки; колби мірні на
250 мл та 1л.

Реактиви: ацетонціангідрин (2 ампули по 0,5 мл – 0,47 г); суміш реактивів (2 флакони по 1,2 г), у т. ч. калій ціаністий – 0,2 г, натрій двовуглекислий – 1,0 г; стандартний розчин гемоглобінціаніду (зберігається у холодильнику при +4 °С).

Методика визначення. До 5 мл робочого розчину у пробірку добавляють 0,02 мл крові і перемішують. Через 10 хвилин знімають показники на фотоелектроколориметрі при довжині хвилі 540 нм (зелений світлофільтр) у кюветі шириною 10 мм проти контрольної проби (робочий розчин або дистильована вода). Записують показники оптичної щільності розчинів, і за формулою чи калібрувальним графіком визначають уміст гемоглобіну в крові (г/100 мл або г/л; табл. 9).

Таблиця 9 – Вміст гемоглобіну у тварин

Збільшення вмісту гемоглобіну в крові тварин (плейохромія, гіперхромемія) спостерігається при згущенні крові (діарея, утворення ексудатів, транссудатів), серцево-легеневій недостатності і поєднується, як правило, зі збільшенням кількості еритроцитів. Зменшення вмісту гемоглобіну (олігохромемія) спостерігається при анеміях різного походження, причиною яких є дефіцит міді, кобальту, заліза, вітамінів В₂, B₁₂, B_c, C, кровотечі, посилений гемоліз еритроцитів, який буває при піроплазмідозах, лептоспірозі, інфекційній анемії коней, пригнічення функції кісткового мозку різними токсинами.