Главная Случайная страница


Полезное:

Как сделать разговор полезным и приятным Как сделать объемную звезду своими руками Как сделать то, что делать не хочется? Как сделать погремушку Как сделать неотразимый комплимент Как противостоять манипуляциям мужчин? Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами Как сделать идею коммерческой Как сделать хорошую растяжку ног? Как сделать наш разум здоровым? Как сделать, чтобы люди обманывали меньше Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили? Как сделать лучше себе и другим людям Как сделать свидание интересным?

Категории:

АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника






Постановка реакции нейтрализации и цветной пробы





РН: основана на нейтрализации инфекционной активности вирусов при связывании со специфическими противовирусными антителами. РН используется для идентификации выделенных вирусов, т.е. для определения видовой и типовой принадлежности вируса.

Постановка: РН воспроизводится в чувствительных к вирусу живых системах.

Из вируссодержащего материала готовят серийные разведения, добавляют к ним специфическую сыворотку в разведении в соответствии с титром, указанным на этикетке ампулы. Смеси вирус-сыворотка инкубируют 30-60 мин. при 37 гр. Для обеспечения связывания АГ с АТ. Затем, смесью заражают культуру ткани, куриные эмбрионы, лабораторных животных. Контролем служит чувствительная система зараженных вирусом без сыворотки.

Учет. Положительный результат: нейтрализация ЦПД (отсутствие дегенеративных изменений) в культуре клеток, патологических изменений в куриных эмбрионах или организме животных. Отрицательный результат: наличие ЦПД, следовательно вирус не был нейтрализован.

Индекс нейтрализации-отношение титра вируса в контроле к титру вируса в опыте. Если ИН менее 10- реакция отрицательна, от 11-49- сомнительная, выше 50- положительная.

Вариант РН- подавление вирусного бляшкообразования под действием вирусспецифической антисыворотки. Постановка. К вируссодержащему материалу добавляют антисыворотку. Инкубация 30-60 мин. Затем смесь наносят на монослой чувствительных культур клеток. Затем покрывают тонким слоем агара. После инкубирования посевов в течение суток на поверхности агара появляются просветленные участки определенной формы (бляшки), представляющие собой участки погибших клеток в сплошном монослое культуры клеток. Титр вируса, установленный этим методом, выражают числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл.

Цветная проба- вариант РН. В результате жизнедеятельности клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты. В результате цвет входящего в состав среды индикатора (фенолового красного) становится оранжевым. При заражении культуры клеток цитопатогенными вирусами метаболизм клеток подавляется, рН среды и ее цвет не изменяются, она остается красной.

Постановка. В пробирки вносят по 0.25 мл рабочего разведения вируса и соответствующего разведения сыворотки. Смесь выдерживают при комнатной температуре 30-60 мин., добавляют в пробирки по 0.25 мл клеточной суспензии, закрывают пробирки пробками. Термостат 6-8 дней при 37 гр. Учет рН 7.4 и выше- репродукция вируса, 7.2 и ниже- нейтрализация антителами.

 








Date: 2015-07-01; view: 1824; Нарушение авторских прав

mydocx.ru - 2015-2018 year. (0.004 sec.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав - Пожаловаться на публикацию