Лабораторная работа. 1. Определение кислотности желудочного сока Оборудование: 1. Стакан на 50 мл. 2. Пипетки на 1 мл и 5 мл

1. Определение кислотности желудочного сока

Принцип метода. При исследовании кислотности желудочного сока определяют несколько показателей: общую кислотность, свободную HCl, связанную HCl, общую HCl. Под общей кислотностью понимают сумму всех кислореагирующих веществ: свободная HCl, связанная HCl, органические кислоты, кислые фосфорнокислые соли. Под связанной HCl понимают кислоту, связанную с белками, общая HCl определяется как сумма свободной и связанной HCl. Определение всех показателей кислотности проводится титрованием 0,1Н раствором едкого натра в присутствии разных индикаторов.

Ход работы. К 5 мл желудочного сока добавляют 1 каплю 1% раствора фенолфталеина и 1 каплю 0,5% раствора диметиламиноазобензола. Перемешивают и титруют 0,1Н раствором щелочи. При появлении желто-оранжевой окраски делают первую отметку пошедшей на титрование щелочи и продолжают титровать до первого появления лимонно-желтой окраски (отметка 2). Затем продолжают титровать до перехода окраски в стойкий розовый цвет (отметка 3). Титрование проводят 2-3 раза и для расчета берут средние значения 1, 2 и 3 отметок.

Расчет: Свободная HCl = 1 х 20

Общая кислотность = 3 х 20

Общая HCl = (2+3)/2 х 20

Связанная HCl = (общая HCl – свободная HCl)

Кислотный остаток = (общая кислотность – общая HCl)

1, 2, 3 – количество мл едкого натра, пошедшего на титрование 1, 2 и 3 отметок, 20 – коэффициент пересчета кислотности на 100 мл сока.

Нормальные показатели кислотности желудочного сока (в мл едкого натра, пошедшего на титрование 100 мл сока): общая кислотность – 40-60 (40-60 ммоль/л), свободная HCl – 20-40 (20-40 ммоль/л), связанная HCl – 10-20 (10-20 ммоль/л), общая HCl – 30-60 (30-60 ммоль/л).

Диагностическое значение определения кислотности желудочного сока

Отсутствие соляной кислоты и пепсина (ахилия) часто наблюдается при злокачественных новообразованиях желудка. Понижение кислотности (гипохлоргидрия) встречается при гипоацидном гастрите, иногда при язвенной болезни желудка. Повышенная кислотность наблюдается при гиперацидном гастрите и часто сопровождается язвенной болезнью желудка и двенадцати-перстной кишки. При гипоацидном гастрите и раке желудка в желудочном соке обычно появляется молочная кислота.

2. Определение белка в сыворотке крови биуретовым методом

Принцип метода. Белки в щелочной среде образуют с сернокислой медью соединения сине-фиолетового цвета (биуретовая реакция). Интенсивность окраски пропорциональна концентрации.

Ход работы. В три пробирки внести реактивы согласно схеме:

Пробы хорошо перемешать, оставить на 15 мин при комнатной температуре. Колориметрировать опытную и стандартную пробы при зеленом светофильтре в кювете толщиной 1 см против контроля.

Расчет провести по обычной формуле.

Нормальное содержание белка в крови – 60 - 75 г/л.

Диагностическое значение определения белка в сыворотке крови

Увеличение белка в крови (гиперпротеинемия) наблюдается сравнительно редко. Относительная гиперпротеинемия наблюдается при сгущении крови из-за значительных потерь жидкости.

Гипопротеинемия наблюдается при недостаточном поступлении белка с пищей, заболеваниях желудочно-кишечного тракта, понижении биосинтеза белка при хронических паренхиматозных гепатитах, интоксикации, злокачественных новообразованиях. Гипопротеинемия может наблюдаться также при потерях белка организмом при острых и хронических кровопотерях, увеличенной проницаемости капилляров, кровопусканиях.

3. Качественное определение белка в моче

Принцип метода. Метод основан на свойстве сульфосалициловой кислоты денатурировать белок, вызывая помутнение раствора. Интенсивность помутнения пропорциональна содержанию белка в моче.

Ход работы. К 4 мл мочи добавляют 8 капель 20% раствора сульфасалициловой кислоты. Наличие белка определяют по помутнению.

Диагностическое значение

Моча здорового человека содержит минимальные количества белка (около 40мг в сутки), не обнаруживаемые качественным реакциями. Выделение белка в количестве более 4,5 мг в час, при котором качественные пробы становятся положительными, называют протеинурией. Почечные протеинурии возникают в результате органического поражения почек. Внепочечные протеинурии наблюдаются при патологических процессах мочевыводящих путей. От истинных почечных протеинурий необходимо отличать функциональные протеинурии, при которых отсутствуют органические поражения почек (протеинурия новорожденных, алиментарная протеинурия, холодовая, маршевая и т. д.). Причиной их чаще всего является увеличение размеров пор почечного фильтра при сильных внешних раздражителях.

Проверка качества усвоения знаний (конечный уровень)

а) вопросы для защиты лабораторной работы

1. Принцип метода определения белка в сыворотке крови.

2. Что такое стандартный раствор белка и зачем он нужен в данном методе?

3. Что такое контрольная проба и зачем она нужна?

4. Почему при определении белка в сыворотке крови используется зеленый светофильтр?

5. По какой формуле рассчитывается концентрация белка?

6. Каково содержание белка в сыворотке здорового человека?

7. На чем основан принцип метода определения белка в моче?