Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
|
Этапы циклизацииI этап — денатурация. Реакционную смесь нагревают до температуры 90 °С в течение нескольких минут. Нагревание приводит к разрыву слабых связей между основаниями молекулы ДНК и образованию из исследуемой двухцепочечной матричной ДНК одноцепочеч-ных молекул. II этап — гибридизация ДНК с праймерами. Температуру снижают до 30—50 °С. При этой температуре возможна специфическая гибридизация цепей ДНК с праймерами. III этап - элонгация (полимеризация). Это синтез последовательностей, комплементарных матричной ДНК. При температуре 60—70 °С, оптимальной для работы Таg-полимеразы, начинается полимеразная цепная реакция. Перемещаясь по матрице в направлении 5'-конца, Таg-полимераза удлиняет праймер, присоединяя к нему один за другим нуклеотидные остатки, комплементарные нуклеотидам матрицы. Дальнейший процесс ПЦР заключается в чередовании циклов. Продолжительность каждого цикла зависит от длины и первичной структуры амплифицируемого участка, но, как правило, не превышает 3—5 мин. За каждый цикл происходит двукратное увеличение числа синтезированных копий, т. е. содержание продуктов амплификации в реакционной смеси нарастает в геометрической прогрессии. Этот трехступенчатый цикл может быть повторен многократно, пока не образуется достаточно материала, необходимого для дальнейших исследований. Полученный материал подвергают фракционированию методом электрофореза в агарозном или полиакриламидном геле. Разработаны специальные полиакриламидные гели, с помощью которых удается разделить фрагменты ДНК длиной до 500 нуклеотидов, отличающихся только на один нуклеотид. По сравнению с традиционными методами диагностики данный метод позволяет проводить быструю, чувствительную и специфическую идентификацию генетического материала. В медицинской диагностике при помощи этого метода можно решать многие вопросы: * Идентифицировать вирусную и бактериальную ДНК в составе ДНК человека. * Проводить пренатальную диагностику наследственных болезней. * Выявлять гетерозиготных носителей дефектных генов. * Определять точную локализацию генов в ДНКчеловека. * Идентифицировать дефектные гены, нарушающие регутяцию пролиферации клеток и вызывающие развитие опухолевых заболеваний. *Проводить анализ и идентифицировать препараты, содержащие сильно деградированную ДНК.
|