Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
|
Кислотный гидролиз нуклеопротеинов
Принцип метода. Нуклеопротеиды – сложные белки, простетической группой которых являются нуклеиновые кислоты. В кислой среде происходит ослабление ионного взаимодействия между белком и нуклеиновыми кислотами и их разделение. При последующем нагревании гидролиз протекает до аминокислот, пуриновых или пиримидиновых оснований, рибозы или дезоксирибозы, фосфорной кислоты. Реактивы: 1. пекарские дрожжи; 2. 10% раствор H2SO4; 3. 10% раствор NaOH; 4. 1% раствор CuSO4; 5. аммиак концентрированный; 6. 1% раствор нитрата серебра; 7. 1% спиртовой раствор тимола (или нафтола); 8. концентрированная H2SO4; 9. 30% раствор NaOH; 10. 7% раствор СuSO4; 11. молибденовый реактив; 12. 1% раствор дифениламина.
Ход работы: 1 г пекарских дрожжей помещают в круглодонную колбу. Добавляют 20 мл 10% раствора серной кислоты, 20 мл воды и закрывают пробкой с обратным холодильником. Кипятят 40-50 мин. Охлаждают, переливают в цилиндр. Доводят до первоначального объема и фильтруют. С фильтратом проделывают качественные реакции на составные части нуклеопротеидов: Проба на пептиды: 5 капель гидролизата смешивают с 10 каплями 10% раствора NaOH и 1 каплей 1 % раствора CuSO4. Содержимое окрашивается в розовый цвет. Проба на пуриновые основания: к 10 каплям гидролизата добавляют 1 каплю концентрированного аммиака и 5 капель 1 % раствора нитрата серебра. Через 3-5 амин появляется бурый осадок серебряных производных пуриновых оснований. Проба на пентозы (реакция Молиша): к 10 каплям гидролизата добавляют 2-3 капли 1% спиртового раствора тимола (или нафтола). Содержимое перемешивают и по стенке приливают 20 капель концентрированной серной кислоты. При встряхивании образуется красное окрашивание продукта конденсации фурфурола с тимолом, образовавшимся из пентозы. Проба Троммера на рибозу и дезоксирибозу: к 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 30% раствора NaOH и 1-3 капли 7% раствора СuSO4 до появления неисчезающей мути Cu(OH)2 перемешивают. При нагревании до кипения выпадает желтый осадок гидроксида меди (I) или красный осадок оксида меди (I). Качественная реакция на рибозу и дезоксирибозу с дифениламином: дифениламин дает синее окрашивание с дезоксирибозой и зеленое - с рибозой. К 5 каплям гидролизата добавляют 20 капель 1% раствора дифениламина и пробирку ставят в кипящую водяную баню на 15 минут. Развивается сине-зеленое окрашивание. Проба на фосфорную кислоту: к 3-5 каплям гидролизата прибавляют 20 капель молибденового реактива (7,5 г молибдена аммония растворяют в 100 мл дистиллированной воды и добавляют 100 мл 32% раствора азотной кислоты с относительной плотностью 1,2) и кипятят несколько минут. Развивается желтое окрашивание. Пробирку сразу охлаждают в струе холодной воды. На дне пробирки появляется кристаллический лимонно-желтый осадок фосфорно-молибденово-кислого аммония.
Результат: ___________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
|