Простые и сложные методы окраски микробов. Принципы окраски по Граму, Циль-Нильсену, Нейссеру. Романовскому -Гимза, их применение

Методы окраски. Окраску мазка производят просты­ми или сложными методами. Простые за­ключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последо­вательное использование нескольких красителей и имеют диффе­ренциально-диагностическое значение. Отношение микроорганиз­мов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, ис­пользуя красители анилинового ряда (основные или кис­лые). Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромо­фор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кис­лые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Ос­новные красители — генциановый фиолетовый, кристал­лический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят на­сыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спирто­вые, которые и служат для окрашивания микробных кле­ток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Ес­ли мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.

Сложные методы окраски применяют для изуче­ния структуры клетки и дифференциации микроорганиз­мов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсион­ной системе. Последовательно нанести на препа­рат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.

Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону, по Ауески, Нейссера, Бури-Гинса.

7. Этапы развития бактериологии. Принципы классификации бактерий. Понятие о виде. Культура. Штамм. Клон.
1.Эмпирических знаний до изобретения микроскопов
2.Морфологический период занял около двухсот лет. Левенгук в 1675г. впервые описал простейших, в 1683г.- основные формы бактерий.
3.Физиологический период (с 1875г.)- эпоха Л.Пастера и Р.Коха. Л.Пастер- изучение микробиологических основ процессов брожения и гниения, развитие промышленной микробиологии, выяснение роли микроорганизмов в кругообороте веществ в природе, открытие анаэробных микроорганизмов, разработка принципов асептики, методов стерилизации, ослабления вирулентности и получения вакцин (вакцинных штаммов). Р.Кох- метод выделения чистых культур на твердых питательных средах, способы окраски бактерий анилиновыми красителями, открытие возбудителей сибирской язвы, холеры. туберкулеза (палочки Коха), совершенствование техники микроскопии.
4.Иммунологический период.
И.И.Мечников- - учение о невосприимчивости (иммунитете), разработав теорию фагоцитоза и обосновав клеточную теорию иммунитета.
Одновременно накапливались данные о выработке в организме антител против бактерий и их токсинов, позволившие П.Эрлиху разработать гуморальную теорию иммунитета. И.И.Мечникову и П.Эрлиху в 1908г. была присуждена Нобелевская премия.
В 1892г. Д.И.Ивановский сообщил, что возбудителем мозаичной болезни табака является фильтрующийся вирус. Эту дату можно считать днем рождения вирусологии, а Д.И.Ивановского - ее основоположником.
5. Следующим важным этапом в развитии микробиологии стало открытие антибиотиков. В 1929г. А.Флеминг открыл пенициллин и началась эра антибиотикотерапии, приведшая к революционному прогрессу медицины.
6. Современный молекулярно- генетический этап развития микробиологии, вирусологии и иммунологии начался во второй половине 20 века в связи с достижениями генетики и молекулярной биологии, созданием электронного микроскопа.
Объектами изучения микробиологии являются представители трех «царств» — Procariotae, к которому относятся бактерии, Eucariotae, включающего грибы (Mycota) и простейших (Pro­tozoa), и Vira, объединяющего вирусы.

Общий признак всех микроорганизмов — очень мелкие размеры. Они невидимы простым глазом и обнаруживаются при помощи микроскопа.

Величину бактерий измеряют в микрометрах (1 мм = 1000 мкм), а размеры органелл микроорганизмов выражают в нанометрах (1 мкм = 1000 нм). При электронной микро­скопии используют еще более мелкие единицы — ангстре­мы (1 мм = 10 000 000 А).

Систематика и классификация микроорганизмов с целью распределения их по группам — таксонам проводится с учетом совокупности признаков и свойств: морфологических, тинкториальных (способности окрашиваться красителями), культуральных, физиолого-биохимических, антигенных, организации генома. Дифференциальными признаками служат также подвижность, спорообразование, чувствительность к бактериофагам и др.
Клон — потомство клеток микроорганизмов, полученных из одной клетки или одной споры. Это генетически идентичные и фенотипически однородные культуры. Клоны можно выделить путем культивирования изолированной клетки или споры на питательной среде. При этом обычно используют несе-лективные среды и проводят на них многократные пересевы клонируемых культур.
Чистая культура — это совокупность микроорганизмов одного вида или варианта, полученная из одной изолированной колонии.
Штамм — чистая культура, выделенная из определенного источника (организма человека, животных, окружающей среды).

8. Структура бактериальной клетки: оболочка, ядерная субстанция, цитоплазма, капсулы, споры, включения, жгутики. Химический состав бактерий. Группы бактерий.

Капсула — наружный защитный слой. Капсула расположена снаружи клеточной стенки бактерии. Ее толщина и химический состав неодинаковы у бактерий различных видов. Иногда капсула в несколько раз превышает по толщине клетку. В некоторых случаях она очень тонкая. В зависимости от толщины и консистенции различают макро- и микрокапсулы и слизистые чехлы. Обычно капсулы представлены полисахаридами. Капсулы выполняют ряд функций. Они защищают клетку от неблагоприятных внешних воздействий. С их помощью не-которые бактерии более прочно присоединяются к субстрату. Например, постоянный обитатель ротовой полости Streptococcus mutans приклеивается с помощью капсулы к поверхности зубов и образует «бляшки».

Клеточная стенка — поверхностная структура. Она пред-ставляет собой внешнюю оболочку, окружающую бактерии. Выполняет функции защиты от внешней среды, поддерживает и сохраняет форму клетки и участвует в транспорте питательных веществ и продуктов метаболизма.

Структура и химический состав клеточной стенки постоянны для определенного вида и служат дифференциальными признаками.

По химическому составу клеточная стенка — сложный био-гетерополимер. Основной компонент в ней представлен пептидогликаном.

Цитоплазматическая мембрана прилегает к клеточной стенке с внутренней стороны и отграничивает цитоплазму. Ее разрушение влечет за собой гибель клетки. У прокариотных микроорганизмов мембрана выполняет защитную, метаболическую функции, участвует в процессе деления клеток и в спо-рообразовании.

Цитоплазма — коллоидная система, состоящая из белков, углеводов, жиров, минеральных веществ, ДНК и РНК.

Генетический материал бактериальной клетки представлен ДНК. Его называют также геномом клетки, ядерным аппаратом, нуклеоидом.

Жгутики — органоиды движения. Они состоят из базально-го тела, локализованного в цитоплазматической мембране, крюка и нити. Жгутики проходят через клеточную стенку и располагаются снаружи клетки в виде нитей.

Спора образуется у бацилл, представляет стадию покоя. Одна клетка превращается в одну спору. Спорообразование не является способом размножения, это приспособление для сохранения вида в неблагоприятных условиях внешней среды.