Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
|
Процесс периодического культивирования дрожжей в лабораторном ферментатореВ подготовленный для культивирования ферментатор (рис. 14) со стерильной питательной средой в стерильных условиях вносят 10 % (об.) инокулята (см. тему 1). В случае использования в качестве посевного материала лиофильно высушенных дрожжей их необходимо предварительно развести в стерильной воде и добавить в ферментатор из расчета 4 г сухих дрожжей на литр питательной среды. Культивирование дрожжей ведут при следующих условиях: - температура культивирования – 28-30 °С; - частота вращения мешалки – 200 об/мин; - время культивирования – от 12 до 24 часов.
Рисунок 14 – Лабораторный ферментатор Анализ процесса культивирования по результатам микроскопирования дрожжей Регулярное микроскопическое наблюдение за клетками дрожжей дает возможность оценить их морфологическое и физиолого-биохимическое состояние, степень чистоты дрожжевой культуры. При микроскопировании характеризуют морфологию дрожжей (их форму, размер), количество почкующихся клеток и характер почкования, количество отмерших клеток, наличие и количество посторонних дрожжей и бактериальных клеток. Определение количества (доли) мертвых дрожжевых клеток Каплю суспензии дрожжей, нанесенную на предметное стекло, смешивают с каплей раствора метиленового синего. Через две минуты пробой полученной смеси заполняют счетную камеру и подсчитывают общее количество дрожжевых клеток, затем количество только мертвых (окрашенных в синий цвет) клеток. Определение гликогена в дрожжевых клетках по методу Селищенской В пробирку отбирают 1 мл пробы дрожжевой суспензии и 0,1 мл 1 н раствора серной кислоты. Через 10 минут добавляют 0,1 мл 0,5 % раствора йода. Через 2-3 минуты готовят препарат «раздавленная капля». Цитоплазма дрожжевых клеток окрашивается в светло-желтый цвет, гранулы гликогена – в красно-бурый цвет раствора йода.
В нормально развивающихся дрожжевых клетках гликоген занимает от 1/3 до 2/3 объема клетки (рис. 15). Если гликогена меньше 1/4 объема клетки, его содержание считается недостаточным. Молодые дрожжи окрашиваются йодом в светло-желтый цвет. В зрелых, старых или голодных клетках гликоген отсутствует или содержится в незначительных количествах в вакуолях.
Рисунок 15 – Дрожжи Saccharomyces cerevisiae в различном возрасте: а – молодые клетки; б – зрелые клетки; в – старые клетки.
Определение морфологического состояния клеток Дрожжи должны иметь форму и размеры, характерные для используемой расы. Молодые клетки должны быть одной величины, с тонкой оболочкой, однородной или мелкозернистой цитоплазмой, небольшими вакуолями. Наличие большого количества морфологически измененных клеток свидетельствует о дегенерации культуры. Зернистая цитоплазма, крупные вакуоли и отсутствие почкующихся клеток характеризует старую культуру. Определение чистоты дрожжевой культуры На предметное стекло наносят каплю 10 % раствора едкого кали и смешивают ее с каплей дрожжевой суспензии. Готовят препарат «раздавленная капля». Микроскопируют препарат и просматривают несколько полей зрения, отмечая наличие диких дрожжей (отличающихся по форме клеток) и бактерий (палочковидные, кокки). Биологически чистой признается культура дрожжей-продуцентов, содержащая не более 1 % бактерий и 0,5 % диких дрожжей. Если количество посторонней микрофлоры значительно превышает эти нормы, то степень зараженности посторонней микрофлорой определяют посевом суспензии дрожжей на несколько элективных питательных сред для выявления количества клеток посторонних микроорганизмов и распределения их по группам. Подсчет числа клеток микроорганизмов в камере Горяева-Тома Счетная камера Горяева-Тома представляет собой толстое предметное стекло, разделенное бороздками на площадки. Центральная часть стекла ниже боковых на 0,1 мм, и на каждой ее площадке нанесена сетка. Площадь большого квадрата сетки равна 1/25 мм2, площадь малого – 1/400 мм2. Каплю исследуемой суспензии наносят на сетку, накрывают шлифованным покровным стеклом и притирают покровное стекло к боковым площадкам камеры путем смещения его в противоположные стороны (до появления радужных пятен на боковых площадках стекла). Можно также сначала притереть покровное стекло, а потом осторожно заполнить камеру из пипетки. Подсчет числа клеток проводят с объективом 8 ´ или 40 ´. Для получения достоверных результатов подсчет следует проводить в 8-10 больших или в 20 малых квадратах сетки и в трех препаратах. При подсчете учитывают все дрожжевые клетки лежащие в квадрате сетки, а также клетки дрожжей пересекающие верхнюю и правую сторону квадрата. При подсчете число клеток микроорганизмов в больших квадратах не должно превышать 20, а в малых – 10. В противном случае исходную дрожжевую суспензию разводят водопроводной водой. Подсчет числа клеток рекомендуется начинать не раньше, чем через 3-5 минут после заполнения камеры, чтобы клетки осели и были видны в одной плоскости. Число клеток в 1 мл исходной суспензии вычисляют по формуле: М = а · 1000 · n / h · S, (3.1) где М – число клеток в 1 мл суспензии; а – среднее число клеток в квадрате сетки; h – глубина камеры (0,1 мм); S – площадь квадрата сетки в мм2; n – коэффициент разведения исследуемой суспензии. Зная значения оптической плотности проб микробных суспензий, отобранных для подсчета числа клеток, можно построить калибровочный график D=f (М). В случае применения данной культуры в дальнейших экспериментах можно, измеряя содержание оптической плотности проб микробной суспензии и пользуясь калибровочным графиком, определять число клеток дрожжей (млн./мл) в отобранных пробах.
|