Получение посевного материала на примере дрожжевой культуры

Для получения посевного материала с целью дальнейшего засева биореактора – ферментатора – и проведения ферментации используется музейная культура дрожжей, хранимая при температуре 4 ⁰С на агаризованной питательной среде в чашках Петри или на косяках в биологических пробирках, либо культура лиофильно высушенных (сублимированных) дрожжей.

Лиофильно высушенные дрожжи вносят непосредственно при засеве в ферментатор из расчета 4-4,5 г на литр питательной среды.

При использовании музейной культуры дрожжи стерильно пересевают с музейного косяка на свежий косяк сусло-агара. Затем пересеянные дрожжи помещают в термостат при температуре 28-30 ⁰С и инкубируют в течение 18‑24 часов. Выращенную культуру дрожжей смывают с косяка физиологическим раствором в стерильных условиях из расчета 5 мл физиологического раствора на косяк. Таким образом получают суспензию дрожжевых клеток для дальнейшего их накопления в жидкой питательной среде.

В качестве жидкой питательной среды для накопления дрожжевой биомассы лучше всего использовать стерильное неохмеленное пивное сусло с концентрацией сухих веществ 6-8 % (сусло доводят до необходимой концентрации сухих веществ водопроводной водой). Питательную среду стерилизуют в автоклаве 30 минут при избыточном давлении 0,5 атм.

В качалочные колбы со стерильной питательной средой стерильно вносят суспензию дрожжей в количестве от 5 до 10 % от объема питательной среды (рис. 5). Следует обратить внимание на то, что при культивировании аэробных микроорганизмов объем питательной среды не должен превышать 10 % от объема колбы для создания удовлетворительных массообменных условий по кислороду. Культивирование микроорганизмов ведут на термостатируемом перемешивающем устройстве («качалке») при определенной амплитуде (или частоте) встряхивания колб. В процессе культивирования дрожжей поддерживают следующие условия: температура – 28-30 °С, число оборотов качалки – 200-220 об/мин, амплитуда – 7. Длительность культивирования составляет от 12 до 24 часов.

Микробная культура, накопленная в процессе культивирования в качалочных колбах и предназначенная для засева ферментатора, либо лиофильно высушенная дрожжевая культура для прямого внесения в ферментатор, называется посевным материалом или инокулятом.

Рисунок 5 – Схема установки

для получения инокулята

дрожжей в качалочных колбах

1 – «качалка»;

2 – качалочные колбы;

3 – косяки с музейной

культурой;

4 – ферментатор