Схема описания постановки опыта

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ

Для определения биологической активности вновь синтезированной лекарственной формы антибиотика применяется метод диффузии препарата в питательный агар. Метод основан на сравнении степени угнетения роста стандартной культуры микроорганизма (тест-микроба) в присутствии известной концентрации рабочего стандарта антибиотика и раствора антибиотика, биологическую активность которого необходимо определить. Рабочие стандарты антибиотиков готовятся и выпускаются в запаянных ампулах Государственным институтом Контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича. Это специально изготовленные и очищенные образцы антибиотиков, которые хранят при температуре не выше 0 градусов по Цельсию.

В качестве тест-микроба используют непатогенные или условно-патогенные штаммы, наиболее чувствительные к данному антибиотику. Например, для определения биологической активности антибиотиков группы пенициллинов используется штамм стафилококка N209.

Методика определения.

В чашки Петри, установленные строго на горизонтальной поверхности, разливают расплавленную и остуженную до 45⁰С питательную среду, в которую предварительно вносят тест-культуру в определенной концентрации. После застывания питательной среды, на ее поверхности с помощью трафарета (подложенного под дно чашки Петри) расставляют 6 стерильных цилиндриков диаметром 6-8 мм или специальным пробойником делают лунки такого же диаметра. В три цилиндрика (лунки) через один пипеткой вносят 0,1 мл испытуемого раствора антибиотика, в остальные, 0,1 мл рабочего стандарта антибиотика известной концентрации. Чашки выдерживают при комнатной температуре в течение 2 часов (за это время происходит диффузия антибиотика в агар). Затем чашки инкубируют в термостате при t+37⁰C в течение 16-18 часов, после чего измеряют зону задержки тест-микроба вокруг цилиндрика (лунки). При определении биологической активности для каждого образца антибиотика готовят не менее 2-х разведений препарата и для каждого разведения используется 2 чашки. На каждой чашке измеряют зоны задержки роста тест-микроба и рассчитывают среднюю арифметическую величину для испытуемого образца и рабочего стандарта антибиотика. Определяют разницу между полученными средними арифметическими величинами первого и второго разведений и по специальной таблице разности диаметров зон определяют биологическую активность испытуемого раствора антибиотика. Полученный показатель биологической активности умножают на показатель разведения и получают активность основного раствора испытуемого антибиотика, которую выражают в (ЕД/мл).