Аллергены, технология их приготовления

Аллергическая диагностика ряда инфекционных (чаще хронических) заболеваний животных и людей основана на феномене сохранения повышенной чувствительности организма к повторному введению того же антигена. Реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) проявляется спустя несколько часов, иногда суток после введения аллергена чувствительному (больному) организму путем проведения кожных проб соответствующим аллергеном

При нанесении аллергенов (туберкулина, маллеина) на конъюнктиву развивается гнойный конъюнктивит. Наибольшая интенсивность реакции наблюдается через 6—9—12 часов после нанесения аллергенов на конъюнктиву.

При подкожном и внутривенном введении аллергенов зараженные животные реагируют повышением температуры тела, учащением дыхания, пульса.

Простота метода, достоверность полученных результатов, возможность применения непосредственно в хозяйствах позволяет широко использовать аллергенов в качестве биопрепаратов с целью прижизненной диагностики бруцеллеза, туберкулеза, сапа. Для диагностики этих заболеваний широко используют бруцеллин, туберкулин, маллеин.

Технология приготовления бруцеллина

Для приготовления бруцеллина используют производственный штамм Вг. abortus в S-форме и не вызывающий образования агглютининов при подкожном введении морским свинкам.

Производственный штамм выращивают в реакторе в питательной среде с 0,5% глюкозы при 37°С в течение 4—5 суток. После выращивания культуру бруцелл прогревают при 105—110°С, затем ее охлаждают и центрифугируют. Надосадочную жидкость (конденсат бруцеллина) фильтруют через стерилизующие пластины и собирают в стерильную емкость. Бактерийную массу разбавляют физиологическим раствором 1:50 и стерилизуют при 105—110°С. Надосадочную жидкость (экстракт бруцеллина) после стерилизующей фильтрации смешивают с ранее полученным концентратом бруцеллина, смесь разводят стерильным физраствором до необходимой концентрации бактериального белка, доводят рН до 7,2—7,4.

Приготовленную серию бруцеллина разливают во флаконы, закрывают их пробками, герметизируют алюминиевыми колпачками. Флаконы стерилизуют в автоклаве при 105—110°С и выдерживают трое суток в термостате при 37°С.

Конечный продукт — бруцеллин — представляет стерильную, прозрачную жидкость светло-коричневого цвета, содержащую продукты жизнедеятельности (метаболизма) бруцелл и специфические вещества белковой природы, извлеченные из них.

Готовый препарат подвергают контролю на стерильность, содержание бактериального белка, концентрацию водородных ионов, безвредность, специфичность и активность.

Технология приготовления туберкулинов

Для диагностики туберкулеза отечественной биопромышленностью готовят аллергены для млекопитающих — сухой очищенный туберкулин PPD — ППД (Purified Protein Derative), и альттуберкулин (АТК). Для диагностики туберкулеза птиц готовят сухой очищенный туберкулин (ППД).

Для приготовления ППД-туберкулина и альттуберкулина для диагностики туберкулеза млекопитающих используют производственные штаммы возбудителя туберкулеза бычьего вида. Их выращивают в модифицированной среде Соттона с аспарагином и лимонной кислотой в течение двух месяцев. Полученную культуру подвергают автоклавированию. Затем белок культуральной жидкости осаждают трихлоруксусной кислотой, центрифугируют и повторно осаждают сернокислым аммонием.

После осаждения протеина надосадочную жидкость удаляют, преципитат растворяют дистиллированной водой и подвергают диализу для удаления остатков сернокислого аммония.

После диализа раствор туберкулина подщелачивают и подвергают фильтрации через стерилизующие пластины или мембраны.

Полученный туберкулин проверяют на стерильность и содержание органических веществ, расфасовывают в ампулы или флаконы объемом 10—20 см³ и подвергают лиофильной сушке.

Затем ампулы запаивают под вакуумом, флаконы заполняют стерильным азотом и герметизируют.

Основной фракцией ППД-туберкулина является белок (73— 90%). Кроме того, он содержит 4—5% полисахаридов, 1—2% нуклеиновых кислот и до 11% липидов. Контроль туберкулинов осуществляют на растворимость, стерильность, концентрацию водородных ионов, безвредность, специфичность и содержание туберкулиновых единиц (ТЕ). Активность выпускаемых серий ППД должна составлять 50000 ТЕ/мл.

Альттуберкулин (АТК) представляет собой стерильный фильтрат двухмесячной культуры микобактерий, выращенной в мясо-гидролизатном картофельно-глицериновом бульоне и выпаренный до 1/10 первоначального объема с добавлением 20% экстракта биомассы микобактерий.

После его изготовления он контролируется аналогично ППД-туберкулину. Активность выпускаемых серий АТК составляет 90000 ТЕ/мл.

Технология приготовления маллеина

Для изготовления противосапных диагностических препаратов — маллеина для аллергической диагностики сапного антигена и позитивной сыворотки — используют штамм №5584 возбудителя сапа, выделенный профессором Д. С. Руженцевым в 1917 году.

Для получения маллеина культуру производственного штамма выращивают в мясо-пептонном глицериновом бульоне (МПГБ) в бутылях в течение 4 месяцев при 37° С. Затем культуру автоклавируют и отстаивают в течение 4 месяцев при 20°С. Затем надосадочную жидкость сливают и фильтруют через стерилизующие пластины или мембраны, разливают в ампулы или флаконы, которые после закупорки стерилизуют автоклавированием. Готовый препарат подвергают контролю на стерильность, безвредность и специфичность.

Примерно по таким же технологиям готовят аллергены для аллергической диагностики других инфекционных заболеваний — туляремии, актиномикоза и т.д.

Вышеизложенная технология получения бруцеллина, туберкулина, маллеина показывает, что, несмотря на ряд технологических различий в их изготовлении, имеются и некоторые общие процессы. Эти препараты представляют собой культуральные жидкости, содержащие продукты метаболизма, автолизаты и экстракты возбудителей соответствующих заболеваний, подвергнутые автоклавированию.

Применение таких диагностических препаратов позволяет эффективно проводить противоэпизоотические мероприятия по ликвидации в стране бруцеллеза, туберкулеза, недопущению заболевания сапом цельнокопытных, животных семейства кошачьих и людей.