Метод серийных разведений в плотной питательной среде

В качестве питательной среды для большинства микроорганизмов используют питательный агар, рН 7,2-7,4. Для приготовления разведений в плотной питательной среде используют основной раствор антибиотиков. Предварительно разливают агар в широкие пробирки по 18 мл. К расплавленному на водяной бане и охлажденному до 55-60 °С агару в пробирках добавляют 2 мл соответствующего разведения антибиотиков в дистиллированной воде, хорошо перемешивают и переливают в чашки Петри. Серия разведений антибиотика должна иметь концентрацию в 10 раз больше той, какую нужно получить в агаре. После застывания в агаре чашки Петри осторожно подсушивают в течение часа, поскольку на влажной поверхности среды отдельные колонии легко сливаются, что делает невозможным учет результатов исследования. При определении чувствительности необходимо иметь контрольную чашку с агаром без антибиотика. Чашки Петри с антибиотиком могут храниться в холодильнике не выше 4°С в течение 24 ч.

Чашки Петри, включая контрольную, делят на несколько секторов, каждый из которых засевают исследуемой культурой. Посев делают бактериальной петлей из культуры, разведенной до концентрации 10⁶-10⁷ м.к. в 1мл. Чашки инкубируют в термостате при 37°С в течение 20-24 ч. Минимальную концентрацию антибиотика, дающую полную видимую задержку роста или единичные колонии, принимают за МПК препарата. Она определяет степень чувствительности испытуемой культуры к данному антибиотику. В том случае, если отмечают рост культуры на поверхности агара во всех чашках, микроорганизм устойчив ко всем испытуемым концентрациям. Отсутствие роста во всех чашках, кроме контрольной, означает, что исследованные концентрации антибиотиков превышают МПК препарата.