Метод серийных разведений в жидкой питательной среде

Для приготовления основного раствора антибиотика берут стандарты антибиотиков, выпускаемые Всероссийским институтом стандартизации и контроля препаратов. На этикетке со стандартами указано число ЕД или мкг, содержащихся в 1 мл антибиотика.

В 14 стерильных пробирок разливают по 4,5 мл питательной среды. В 1-ю добавляют 4,5 мл основного раствора антибиотика, перемешивают, после чего 4,5 мл полученного раствора переносят в следующую пробирку и т.д. Из 13-й пробирки после перемешивания удаляют 4,5 мл. В качестве контроля роста культуры используют 14-ю пробирку, не содержащую антибиотик. Интервал концентраций составляет от 500 мкг/мл в 1-й пробирке до 0,1 мкг/мл в 13-й пробирке. Такой интервал обычно достаточен для определения чувствительности микроорганизмов к большинству антибиотиков.

Суточную бульонную или агаровую культуры исследуемых микроорганизмов разводят физиологическим раствором до концентрации 5∙10⁶ микробных клеток в 1 мл. Затем во все 14 пробирок добавляют по 0,5 мл приготовленной взвеси микроорганизмов. Пробирки инкубируют при 37°С в течение 18-20 ч. Минимальное количество антибиотика, дающее полную видимую задержку роста культуры (прозрачный бульон), соответствует МПК препарата и определяет степень чувствительности испытуемого возбудителя к данному антибиотику. Если среда помутнела во всех пробирках, то микроорганизм устойчив ко всем испытанным концентрациям препарата. Отсутствие роста культуры во всех пробирках, кроме контрольной, означает, что выбранные концентрации антибиотика превышают МПК. Для установления бактерицидного действия антибиотика из последних, прозрачных проб после осторожного взбалтывания жидкости, проводят посев на агаровую или бульонную среды. Наименьшую концентрацию антибиотика в пробирке, посев из которой при инкубации в течение 24-72 ч не дает роста в питательной среде, принимают за минимальную бактерицидную концентрацию.