Клетки амниотической жидкости

Клетки амниотической жидкости (КАЖ) представлены несколькими типами различного происхождения:

• клетки амниотической оболочки (собственно амниоциты);

• эпителиальные клетки плода (эпидермиса, пищеварительного тракта, мочеполовых и дыхательных путей, слизистой ротовой полости).

Количественный и качественный состав КАЖ, а также концентрация жизнеспособных клеток имеют индивидуальную вариабельность и зависят от стадии развития. Оптимальными для ПД являются амниоциты, которые обычно активно пролиферируют и являются специфическими для данной культуры. Наиболее часто для культивирования используют амниотические клетки, полученные в срок 15-18 недель беременности. Использование для этих целей амниоцитов более ранних (12-14 недель беременности) или более поздних (после 20-й недели беременности) сроков принципиально возможно, но, как правило, резко осложняет и удлиняет процесс диагностики.

Стандартное культивирование амниоцитов с момента получения образца АЖ до кариотипирования занимает 14-21 день. К недостаткам можно отнести высокую стоимость культуральных питательных сред и оборудования, что немаловажно для отечественных лабораторий, а также высокую (до 2 %) вероятность контаминации образца клетками материнского происхождения.

Клетки ворсин хориона (плаценты)

Клетки ворсинчатого хориона (плаценты), доступные для ПД, имеют различное происхождение:

• клетки цитотрофобласта (дифференцируются на стадии морулы);

• клетки мезенхимы (дифференцируются на стадии бластоцисты). Для хромосомного анализа по клеткам хориона или плаценты

используют два основных метода.

1. Длительное культивирование: растущие в монослое первичные культуры имеют гетерогенный клеточный состав с преимущественным ростом фибробластоподобных клеток мезенхимальной стромы ворсин. Образование колоний или рыхлого монослоя происходит обычно к 10-12 дню культивирования. Основными недостатками метода являются длительность культивирования и контаминация культур материнскими клетками.

2. «Прямые» препараты. Метод анализа «прямых» препаратов базируется на исследовании спонтанно делящихся клеток цитотрофобласта без их предварительного культивирования в сроки от 10 до 20 недель беременности.

Разработаны модификации прямого метода — метод «стряхивания — отпечатывания» и ускоренный прямой метод, которые позволяют получать препараты из хориона/плаценты, удовлетворяющие всем критериям кариотипирования. В сочетании с флуоресцентными методами дифференциальной окраски хромосом результативность этих методов превышает 99 %.

Следует подчеркнуть, что эти модификации пригодны для приготовления препаратов хромосом из тканей с высокой естественной ми-тотической активностью, включая любые ткани и органы зародыша. Интерфазные ядра, обработанные таким способом, вполне пригодны для метода FISH со специфическими ДНК-зондами, что важно при верификации онтогенетического пренатального диагноза.