Задание 1. Сосудистая реакция при воспалении брыжейки кишечника лягушки

(Опыт Конгейма)

Необходимые животные и оборудование на 1 рабочее место:

1. Лягушка.

2. Резиновая пластинка с отверстиями.

3. Микроскоп (ок. 10, об. 8).

4. Препаровалъная игла.

5. Глазной пинцет.

6. Ножницы.

7. Булавки - 6 шт.

8. 0,7% раствор хлористого натрия - 10 мл.

9. Вата - 5 г.

Ход исследования:

Обездвиженную лягушку помещают на резиновую пластинку животом вниз. С правой стороны вскрывают брюшную полость и извлекают брыжейку тонкого кишечника. Брыжейку веерообразно расправляют над отверстием в резиновой пластинке и фиксируют булавками за кишечник, как показано на рис. 24. Во избежание нарушения кровообращения в сосудах брыжейки петля кишечника не должна быть перекручена и сильно растянута. Подготовленный препарат помещают на столик микроскопа и рассматривают. Просмотрев бегло весь препарат, выбирают для детального наблюдения участок брыжейки с разветвленной сетью мелких сосудов. Вследствие травмы (извлечение кишечника и расправление брыжейки) и нахождения кишечника в необычных условиях (воздушная среда) через 5 - 10 минут в брыжейке развивается острое воспаление.

В первый момент воспаления возникает сужение сосудов (остается незамеченным), в дальнейшем происходит расширение их. Ток крови ускоряется. В сосудах можно различить широкий осевой слой (форменные элементы крови) и узкий краевой (плазматический). Ускорение кровотока в последующем сменяется замедлением. Местами в артериях можно наблюдать маятникообразное движение крови. В этот период лейкоциты начинают принимать краевое стояние и прилипают к внутренней стенке сосудов (стадия краевого стояния лейкоцитов). Далее лейкоциты начинают терять округлую форму, проникают в толщу стенки и постепенно мигрируют за ее пределы в ткань.

Наблюдение проводится в течение длительного времени - 1 - 2 часа. Зарисовывают краевое стояние лейкоцитов.

Задание 2. Сосудистая реакция и эмиграция лейкоцитов при развитии острого воспаления мочевого пузыря лягушки

Необходимые животные и оборудование на 1 рабочее место:

1. Лягушка та же, что и в предыдущем опыте.

2. Оборудование то же.

Дополнительно:

1. Канюля с резиновой трубкой и стеклянным наконечником.

2. Покровное стекло.

3. Спирт - 5 мл.

Ход исследования:

Опыт ставят на лягушке, использованной в предыдущем эксперименте. В задний проход лягушки вставляют стеклянную канюлю с резиновой трубкой, через которую мочевой пузырь слегка раздувают. Мочевой пузырь извлекают из брюшной полости через боковой разрез, прикрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом (рис. 29).

В стенке мочевого пузыря под влиянием атмосферного воздуха развивается воспаление, при котором особенно рельефно выступают явления краевого стояния и эмиграции лейкоцитов.

Зарисовывают краевое стояние лейкоцитов и рассматривают механизм развития сосудистых изменений при воспалении.

Задание 3. Определение протеолитической активности ферментов гноя

Необходимое оборудование на 1 рабочее место:

1. Отстой гноя (№ 1)- 5 мл.

2. Штатив с пробирками (6 шт.).

3. 1% раствор казеина - 6 мл.

4. Реактив на белок (смесь 5 мл ледяной уксусной кислоты, 45 мл 96⁰ спирта с 50 мл дистиллированной воды) - 2,0 мл.

5. Пипетка объемом 1,0 мл.

6. Глазная пипетка - 2 шт.

7. Термостат.

Ход исследования:

В 6 пробирок (диаметр 0,5 - 0,7 мм) наливают по 1 мл раствора белка (казеина) и во все пробирки, кроме первой, добавляют отстой гноя (№ 1) в возрастающем количестве (2 - 4 - 6 - 8 и 10 капель). Содержимое пробирок встряхивают и помещают в термостат на 30 минут при температуре 37⁰С. По истечении этого срока пробирки извлекают из термостата и добавляют по 2 капли реактива на белок.

Реактив на белок, взаимодействуя с казеином, дает мутное кольцо или хлопья. При наличии в гное протеолитических ферментов произойдет расщепление белка, и кольцо не будет образовано или будет слабо выражено.

Полученные результаты заносят в таблицу 10.

Таблица 10

Оценка реакции производится знаком +; ++; +++, в зависимости от величины кольца (или интенсивности появления хлопьев). Знаком - обозначается отсутствие кольца или хлопьев.

Задание 4. Определение амилолитической активности ферментов гноя

Необходимое оборудование на 1 рабочее место:

1. Отстой гноя (№ 2) - 5,0 мл.

2. Штатив с пробирками (6 шт.).

3. 1% раствор крахмала - 6,0 мл.

4. Реактив на крахмал - раствор Люголя (1 часть йода, 2 части йодида калия и 17 частей воды) - 2,0 мл.

5. Пипетка объемом 1,О мл.

б. Глазная пипетка (2 шт.).

7. Термостат.

Ход исследования:

В 6 пробирок наливают по 1 мл раствора крахмала во все пробирки, кроме первой, добавляют отстой гноя (М~ 2) в возрастающем количестве (2 - 4 - б - 8 - 10 капель). Содержимое пробирок встряхивают и помещают, в термостат на 30 минут при температуре 37⁰ С. После извлечения пробирок из термостата в каждую добавляют по 1 капле реактива на крахмал (раствор Люголя). различной окраске содержимого пробирок отмечают результаты переваривания крахмала амилолитическими ферментами гноя. Результаты исследования заносят в таблицу 11.

Таблица