Техника определения групп крови человека системы АВ0

Определение группы крови АВ0 производится в нативной крови, стабилизированной с помощью применяемых консервантов (глюгицир, цитроглюкофосфат, гепарин и др.), и крови, взятой из пальца (без консерванта).

Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов.

Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре от +15 до +25 градусов Цельсия.

Реагенты не должны хранится открытыми, так как при высыхании активность антител снижается. Не следует пользоваться реагентами, если в них имеются нерастворимые хлопья или помутнение. Для каждого реагента используют свою маркированную («анти-А» или «анти-В») пипетку.

Для каждого определения группы крови достаточно применять по одной серии реагентов анти-А и анти-В. На планшет или пластину Цоликлоны анти-А и анти-В наносят по одной большой капле (0,1 мл) по соответствующими надписями: анти-А и анти-В. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше капли антител (0,01 мл). В случае определения группы крови, взятой из пальца или взятой без консерванта, необходимо обеспечить достаточно большое количество эритроцитов, т. е. надо брать первые капли из пальца (без сильного выдавливания) или свободные эритроциты из осадка свернувшейся крови (без избытка сыворотки).

При определении группы крови на планшете антитела и крови смешивают тщательно вымытым сухим шариком, покачивая планшет; при определении на пластинке — стеклянной палочкой, которую промывают и досуха вытирают перед размешиванием каждой капли.

Наблюдение за ходом реакции с Цоликлонами проводят при легком покачивании пластинки или планшета в течение не более 2,5 минут.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным.

Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся и образующих крупные хлопья вплоть до одного большого агглютината.

При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Агглютинация с Цоликлонами анти-А и анти-В обычно наступает в первые 3-5 секунд. Наблюдение следует вести 2,5 минуты ввиду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Оценка результатов реакции агглютинации с Цоликлонами анти-А и анти-В представлены в таблице, в которую также включены результаты определения агглютинатов в сыворотке (плазме) доноров с помощью стандартных эритроцитов.

1. Агглютинации нет ни с Цоликлоном анти-А, ни с Цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты не содержат антигенов А и В, и кровь принадлежит к группе 0 (I). Это подтверждается наличием агглютининов альфа и бета в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами групп А (II) и B (III).

2. Агглютинация наблюдается только с Цоликлоном анти-А. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только антиген А, и кровь принадлежит к группе А(II). Это подтверждается наличием агглютининов бета в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами группы В (III).

3. Агглютинация наблюдается только с Цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только антиген В, и кровь принадлежит к группе В (III). Это подтверждается наличием агглютининов В (III) в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами группы А (II).

4. Агглютинация наблюдается как с Цоликлоном анти-А, так и с Цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат оба антигена (А и В), и кровь принадлежит к группе АВ (IV). Это подтверждается отсутствием агглютининов альфа и бета в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам отрицательной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами групп А (II) и В (III).