Трепонемные реакции

а. Реакция иммобилизации трепонем. Метод основан на способности антител вызывать иммобилизацию живых трепонем в присутствии комплемента. Реакция оценивается с помощью микроскопии в темном поле. Несмотря на высокую стоимость и большие затраты времени, она относится к наиболее специфичным трепонемным реакциям. Однако чувствительность метода невысока — примерно у 70% больных первичным сифилисом и 30% больных вторичным сифилисом его результаты бывают отрицательными. Кроме того, этот метод не позволяет отличить возбудителя сифилиса от возбудителей других заболеваний, вызываемых трепонемами: фрамбезии, беджели и пинты.

б. Реакция иммунофлюоресценции-абсорбции. Перед постановкой реакции исследуемую сыворотку обрабатывают специальным сорбентом для удаления неспецифических для Treponema pallidum антител. К инактивированным трепонемам добавляют обработанную сыворотку, а затем антитела к иммуноглобулинам, меченные флюоресцеина изотиоцианатом.

1) Реакцию оценивают количественно по интенсивности флюоресценции: «–» — отрицательная, «+/–» — сомнительная, «+» — слабо положительная, «++» — умеренно положительная, «+++» — положительная, «++++» — резко положительная. При сифилисе и других заболеваниях, вызванных трепонемами (беджели, фрамбезии и пинте), реакция, как правило, положительная. В большинстве лабораторий реакцию иммунофлюоресценции-абсорбции проводят со всеми сыворотками, которые дали положительную реакцию при постановке VDRL.

2) Реакция иммунофлюоресценции-абсорбции — наиболее информативный серологической метод диагностики сифилиса на всех стадиях. Диагноз первичного сифилиса с помощью этого метода удается поставить в 86%, вторичного — в 100%, раннего латентного — в 99%, позднего латентного — в 96%, третичного — в 97% случаев. Однако реакция иммунофлюоресценции-абсорбции не подходит для наблюдения за больными сифилисом, поскольку она остается положительной спустя несколько лет после выздоровления, а иногда и в течение всей жизни. Реакция иммунофлюоресценции-абсорбции редко бывает ложноположительной. Сомнительные результаты возможны у беременных, пожилых, больных СКВ и другими коллагенозами и у наркоманов. Если реакция преципитации плазмы с кардиолипиновым антигеном положительна, а реакция иммунофлюоресценции-абсорбции слабо положительна, последнюю повторяют ежемесячно. Диагностически значимым считается четырехкратное повышение титра антител к Treponema pallidum. Реакция иммунофлюоресценции-абсорбции, как и реакция иммобилизации трепонем, не позволяет отличить возбудителя сифилиса от других трепонем.

в. Реакция непрямой гемагглютинации технически проще, чем реакция иммунофлюоресценции-абсорбции. Реакцию непрямой гемагглютинации, как и другие трепонемные реакции, используют для подтверждения результатов нетрепонемных тестов.

г. Тест Рейтера — реакция связывания комплемента антителами к антигену непатогенной трепонемы Рейтера — в настоящее время не применяется.

С. Лаймская болезнь впервые описана в 1975 г. среди жителей г. Лайма, штат Коннектикут, США. Возбудитель — Borrelia burgdorferi, переносчики инфекции — клещи. Характерные признаки заболевания — хроническая мигрирующая эритема и артрит, иногда отмечается поражение ЦНС и сердца. Серодиагностику проводят с помощью твердофазного ИФА и метода непрямой иммунофлюоресценции, для подтверждения диагноза применяют иммуноблоттинг. Следует отметить, что оценка результатов серологических исследований затруднена. Так, наличие антител достоверно свидетельствует лишь о перенесенной инфекции, а в острой стадии заболевания и на фоне антимикробной терапии антитела могут не выявляться.

Т. Возвратные тифы. Возбудителями этих заболеваний являются несколько видов боррелий — спиралевидных микроорганизмов, окрашивающихся анилиновыми красителями. Переносчиками эпидемического возвратного тифа служат вши, а эндемического возвратного тифа — клещи. Лабораторная диагностика возвратных тифов основана на выявлении возбудителей в толстой капле или мазке крови, окрашенном по Райту или Гимзе. Для эпидемического возвратного тифа характерны следующие серологические признаки: присутствие агглютинирующих антител к штамму Proteus OX-K в титре 1:40 и выше (у 90% больных), положительная реакция связывания комплемента (у 50% больных), реакция лизиса боррелий сывороткой в разведении не менее 1:100 (у 50—60% больных). Для эндемического возвратного тифа перечисленные лабораторные признаки менее характерны.

У. Лептоспироз передается человеку от животных. Заболевание может протекать как в легкой, так и в тяжелой форме, для которой характерна высокая лихорадка. Тяжелая форма лептоспироза может закончиться смертью. В качестве стандартного метода диагностики лептоспироза обычно используется реакция агглютинации лептоспир сывороткой больного. Это высокочувствительный и специфичный метод диагностики, однако для его выполнения необходимы живые микроорганизмы, принадлежащие к определенным серотипам лептоспир. Агглютинирующие антитела начинают появляться через 6—12 сут после заражения, через 3—4 нед их титр становится максимальным. Для диагностики лептоспироза, кроме того, применяют твердофазный ИФА и реакцию непрямой гемагглютинации. Последний метод позволяет отличить текущую инфекцию от недавно перенесенной.

VII. Диагностика грибковых инфекций. Диагноз грибковых инфекций основан на выделении возбудителя в посевах крови или биоптатов тканей. Грибковые инфекции часто возникают при иммунодефицитах, серологические реакции при которых нередко бывают отрицательными. Следует учитывать, что антитела к возбудителям грибковых инфекций часто выявляются и у здоровых, проживающих в районах с широким распространением грибов. Для диагностики некоторых грибковых инфекций применяются кожные пробы, основанные на аллергических реакциях замедленного типа. Антиген обычно вводят в дозе 0,1 мл внутрикожно во внутреннюю поверхность предплечья (см. табл. 22.2). Реакцию оценивают через 48—72 ч по диаметру эритемы и папулы в месте инъекции. Кожные пробы становятся положительными через 2—10 нед после заражения, серологические реакции — в более ранние сроки.

А. Аспергиллез. Aspergillus spp. — повсеместно распространенные грибы, вызывающие инфекцию с разнообразными проявлениями. Диагноз обычно ставят на основании результатов посева биоптатов пораженных органов. Серодиагностика аспергиллеза основана на методах иммунодиффузии и твердофазного ИФА. Диагноз аллергического бронхолегочного аспергиллеза ставят при выявлении антител к возбудителю и положительной кожной пробе с Aspergillus fumigatus, основанной на аллергической реакции немедленного типа.

Б. Североамериканский бластомикоз. Это заболевание распространено в северо-западных, юго-восточных, южных и центральных штатах США, особенно в бассейнах рек Миссисипи и Огайо. Инфекция проявляется поражением кожи или внутренних органов. Для диагностики североамериканского бластомикоза применяются методы иммунодиффузии, реакция связывания комплемента, РИА и твердофазный ИФА. Однако из-за большого количества ложноположительных и ложноотрицательных результатов эти методы не позволяют с точностью поставить или исключить диагноз. Антитела к возбудителю североамериканского бластомикоза перекрестно реагируют с возбудителями кокцидиоидоза, гистоплазмоза и паракокцидиоидоза.

В. Кандидоз. Серодиагностика ненадежна и обычно не проводится.

Г. Кокцидиоидоз подозревают при поражении легких, головного мозга или диссеминированной инфекции у жителей районов с широким распространением возбудителя инфекции или лиц, посетивших эти районы (например, юго-западную часть США). На начальном этапе обследования применяют кожную пробу с антигенами возбудителя, которая становится положительной через 2—3 нед после появления симптомов заболевания и может оставаться положительной в течение многих лет. При генерализованной инфекции кожные пробы часто бывают отрицательными. Реакция связывания комплемента и методы, основанные на реакциях преципитации и агглютинации, позволяют выявить антитела к разным антигенам возбудителя. Эти методы дополняют друг друга, в сочетании их чувствительность превышает 90%.

1. Реакция преципитации позволяет выявить IgM, которые появляются на ранних стадиях инфекции и при ее обострении.

2. Реакция связывания комплемента позволяет выявить IgG, которые появляются на поздних стадиях заболевания и могут присутствовать в сыворотке спустя много лет после перенесенного кокцидиоидоза. Одновременное выявление IgG в титре от 1:2 до 1:8 с помощью реакции связывания комплемента и методов иммунодиффузии свидетельствует об острой или недавно перенесенной инфекции. Выявление IgG в титре 1:16 и более характерно для генерализованной инфекции. Титр антител определяют повторно через 3 нед. При бессимптомно протекающей легочной форме кокцидиоидоза или легочной форме, сопровождающейся образованием каверн, антитела могут не выявляться. Серологические реакции бывают также отрицательными при исследовании СМЖ больных кокцидиоидозным менингитом.

3. Методы иммунодиффузии по чувствительности и специфичности сопоставимы с реакцией связывания комплемента.

4. Реакция латекс-агглютинации высокочувствительна, но менее специфична и применяется на начальных этапах обследования.

Д. Криптококкоз — заболевание из группы глубоких микозов, проявляющееся поражением ЦНС, легких или генерализованной инфекцией. Наиболее характерное проявление криптококкоза — менингоэнцефалит. Особенно высок риск этой инфекции при иммунодефиците. Антитела к возбудителю в сыворотке не определяют, поскольку они выявляются лишь у трети больных с криптококковым менингитом и иногда присутствуют в сыворотке здоровых. Диагноз ставят при выявлении Cryptococcus neoformans в посевах и мазках, контрастированных тушью, а также при выявлении криптококковых антигенов в биологических жидкостях, прежде всего СМЖ. Высокочувствительна и специфична реакция латекс-агглютинации с антителами к полисахаридным антигенам капсулы Cryptococcus neoformans. Она дает ложноположительные результаты лишь в присутствии ревматоидного фактора.

Е. Гистоплазмоз. Эта инфекция особенно распространена в центральной части США. Заболевание может протекать с преимущественным поражением легких или в виде генерализованной инфекции, проявляющейся прежде всего менингитом и гепатоспленомегалией. Диагноз основан на результатах посева. Для него обычно используют биоптаты пораженного органа. Серологические методы (реакция связывания комплемента и методы иммунодиффузии) подтверждают диагноз: значимым считается не менее чем четырехкратное повышение титра антител или высокий титр при однократном исследовании сыворотки. Однако результаты серологических исследований надо оценивать только в совокупности с клинической картиной, поскольку реакция связывания комплемента часто бывает ложноположительной. Последнее объясняется тем, что антитела к гистоплазмам перекрестно реагируют с возбудителями аспергиллеза и североамериканского бластомикоза. В районах распространения гистоплазм антитела к ним выявляются и в сыворотке здоровых. При гистоплазмозе у больных ВИЧ-инфекцией антитела к возбудителю часто отсутствуют.

Ж. Паракокцидиоидоз — заболевание, распространенное в Латинской Америке. Протекает хронически, характеризуется поражением легких, кожи, слизистых и увеличением лимфоузлов. Для диагностики заболевания применяют реакцию связывания комплемента, методы иммунодиффузии и твердофазный ИФА. Эти методы информативны и доступны большинству лабораторий.

З. Споротрихоз. Заболевание чаще всего проявляется поражением кожи, подкожной клетчатки (с образованием абсцедирующих узлов), костей, суставов, увеличением лимфоузлов и пневмонией. Возбудитель обитает в почве и на некоторых видах растений. Заражение обычно происходит через поврежденную кожу. Диагноз основан на выявлении возбудителя в посеве синовиальной жидкости и биоптатах пораженных участков кожи и других тканей. Серологические методы диагностики не получили широкого распространения.

VIII. Диагностика паразитарных заболеваний. Серодиагностика паразитарных заболеваний малоинформативна, поскольку не позволяет отличить острую инфекцию от ранее перенесенной. Серологическое исследование помогает поставить диагноз лишь при некоторых гельминтозах. При подозрении на паразитарное заболевание рекомендуется консультация в Отделе паразитологии Центра по контролю заболеваемости.