Визначення неорганічного фосфору за реакцією з аскорбіновою кислотою

Обладнання та посуд: центрифуга, фотоелектроколориметр (ФЕК-56М, КФК-3), скляні піпетки на 1 мл, 2 і 5 мл, центрифужні пробірки.

Реактиви: 1 %-ний розчин аскорбінової кислоти, який приготовлений перед дослідженням на 0,1 N-ному розчині сірчаної кислоти; 2,5 %-ний розчин амонію молібденовокислого (2,5 г реактиву розчиняють при нагріванні в 50–60 мл дистильованої води, після охолодження до розчину додають 7,5 мл концентрованої сірчаної кислоти і дистильовану воду до мітки 100 мл; розчин зберігається у склянці із темного скла близько 2-х місяців); 10 %-ний розчин трихлороцтової кислоти (ТХО); 0,1 N-ний розчин соляної кислоти; основний стандартний розчин фосфору (0,4394 г калію фосфорнокислого однозаміщеного висушують до постійної маси, розчиняють у колбі на 100 мл, 1 мл основного розчину містить 1 мг фосфору).

Методика визначення. У центрифужну пробірку вносять 2 мл бідистильованої води, 0,2 мл сироватки крові і 2,2 мл 10 %-ного розчину ТХО, перемішують і через 10 хв центрифугують 15 хв при 1,5 тис об/хв (10 хв при 3 тис. об/хв). У чисту пробірку відбирають 1,5 мл надосадової рідини (центрифугату), додають 1 мл молібденового реактиву, 1 мл розчину аскорбінової кислоти і рівно через 10 хв фотометрують на ФЕК-56М, КФК-2 чи КФК-3 при довжині хвилі 660 нм (червоний світлофільтр) проти дистильованої води в кюветі з товщиною робочого шару 5 мм.

Одночасно ставлять контроль на вміст фосфору у воді і реактивах, який потім вираховують із результатів дослідних проб.

Кількість неорганічного фосфору визначають за таблицею, що складена на основі стандартної кривої. Для її побудови до 1 мл основного розчину калію фосфорнокислого однозаміщеного додають 99 мл води. Потім у 6 пробірок вносять реактиви і воду згідно схеми (табл. 15).

Таблиця 15 – Схема приготування проб для побудови стандартної кривої

З кожної пробірки беруть по 1,5 мл суміші, переносять у дві інші, куди послідовно додають 1 мл молібденового реактиву і 1 мл аскорбінової кислоти. Через 10 хв колориметрують. По осі абсцис відкладають вміст фосфору, по осі ординат – відповідну йому екстинцію розчину.