Схема титрования комплемента в бактериолитической системе

--------------------T--------T---------------------------------------

----------

¦ Компоненты реакции ¦ Ряд про- ¦ Номера

пробирок ¦

¦ ¦ бирок в +----T----T----T----T----T----T----T----

T----T----+

¦ ¦ штативе ¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦ 5 ¦ 6 ¦ 7 ¦ 8

¦ 9 ¦ 10 ¦

+-------------------+--------+----+----+----+----+----+----+----+----

+----+----+

¦ Негативная ¦ первый ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2

¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦

¦ сыворотка 1:5 ¦ второй ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2

¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦

¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦

¦ ¦ ¦

¦ Антиген в рабочем ¦ первый ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2

¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦

¦ титре ¦ второй ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ -

¦ - ¦ - ¦

¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦

¦ ¦ ¦

¦ Физиологический ¦ первый ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦ -

¦ - ¦ - ¦

¦ раствор ¦ второй ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦ 0,2

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

¦ 0,2 ¦ 0,2 ¦

¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦

¦ ¦ ¦

¦ Комплемент в разве- ¦ первый

¦ 0,02 ¦ 0,04 ¦ 0,06 ¦ 0,08 ¦ 0,10 ¦ 0,12 ¦ 0,14 ¦ 0,16 ¦ 0,18 ¦ 0,20 ¦

¦ дении 1:20 ¦ второй

¦ 0,02 ¦ 0,04 ¦ 0,06 ¦ 0,08 ¦ 0,10 ¦ 0,12 ¦ 0,14 ¦ 0,16 ¦ 0,18 ¦ 0,20 ¦

¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦

¦ ¦ ¦

¦ Недостающее коли- ¦ первый

¦ 0,18 ¦ 0,16 ¦ 0,14 ¦ 0,12 ¦ 0,10 ¦ 0,08 ¦ 0,06 ¦ 0,04 ¦ 0,02 ¦ - ¦

¦ чество физиологи- ¦ второй

¦ 0,18 ¦ 0,16 ¦ 0,14 ¦ 0,12 ¦ 0,10 ¦ 0,08 ¦ 0,06 ¦ 0,04 ¦ 0,02 ¦ - ¦

¦ ческого раствора ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦

¦ ¦ ¦

¦

¦

¦ Водяная баня 20 минут при 37 -

38° ¦

¦

¦

¦ Гемолитическая ¦ первый ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4

¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦

¦ система ¦ второй ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦ 0,4

¦ 0,4 ¦ 0,4 ¦

¦

¦

¦ Водяная баня 20 минут при 37 -

38° ¦

¦

¦

¦ Примерный результат ¦ первый ¦ НГ ¦ НГ ¦ ЧГ ¦ ЧГ ¦ ПГ ¦ ПГ ¦ ПГ ¦ ПГ

¦ ПГ ¦ ПГ ¦

¦ ¦ второй ¦ НГ ¦ НГ ¦ ЧГ ¦ ЧГ ¦ ПГ ¦ ПГ ¦ ПГ ¦ ПГ

¦ ПГ ¦ ПГ ¦

L-------------------+--------+----+----+----+----+----+----+----+----

+----+-----

Обозначения: ПГ - полный гемолиз, ЧГ - частичный гемолиз, НГ - нет гемолиза.

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

Примечание. Для удобства в работе и более точной дозировки вначале рекомендуется

приготовить необходимые разведения комплемента в 10-кратных объемах в отдельных пробирках.

Для этого в дополнительный ряд пробирок вносят комплемент, разведенный 1:20, в дозах 0,2; 0,4; 0,6

мл и т.д. до 2 мл, добавляют в каждую пробирку недостающее до 2 мл количество физиологического

раствора, то есть соответственно 1,8; 1,6; 1,4 мл и т.д. Из первой пробирки этого ряда переносят по

0,2 мл жидкости в первые пробирки с сыворотками, взятыми для титрования, из второй пробирки -

соответственно во вторые пробирки с сыворотками и т.д. Работу можно выполнять аппаратом

Флоринского.

Титром комплемента в бактериолитической системе считают минимальное его количество,

вызывающее полный гемолиз взвести эритроцитов в пробирках с негативной и испытуемой

сыворотками с антигеном и без антигена, а также в пробирках с позитивной сывороткой без антигена

в течение 20 мин. в водяной бане при 37 - 38°, при задержке гемолиза в пробирках с бруцеллезной

сывороткой и антигеном.

Примечание. Если в пробирках с испытуемой сывороткой и антигеном отмечают задержку

гемолиза более чем на один интервал по сравнению с этой же сывороткой без антигена, это означает,

что для титрования была взята положительная сыворотка. В таких случаях определение титра

комплемента проводят по ряду пробирок без антигена.

В примере, приведенном в таблице 2, титр комплемента в бактериолитической системе равен

0,1. Рабочий титр комплемента для главного опыта на 0,02 больше, в данном случае 0,12.

Таблица 2