Подготовка к анализу

1. Приготовление раствора крахмала с массовой долей 1% (субстрата).

(1,00 + 0,01) г крахмала, взятого с учетом влажности, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, добавляют 25 см³ воды и перемешивают. Затем добавляют в колбу еще 25 см³ воды, помещают колбу в кипящую водяную баню не менее чем на 10-15 мин, непрерывно перемешивая содержимое до полного растворения крахмала. После этого содержимое колбы охлаждают, добавляют 10 см³ фосфатного буферного раствора с рН 6,0. Объем жидкости доводят до метки дистиллированной водой и содержимое колбы перемешивают. Раствор должен быть прозрачным.

Раствор крахмала готовят в день проведения анализа.

2. Приготовление фосфатного буферного раствора с рН 6,0.

Смешивают растворы фосфорнокислого натрия и фосфорнокислого калия концентрацией 1/15 моль/дм³ в соотношении 1:9.

Величину рН проверяют на прибор. В случае отклонения рН буфера от требуемого, соответствующими растворами доводят его до нормы.

3. Приготовление основного раствора йода.

0,50 г йода и 5,00 г йодистого калия растворяют в бюксе с притертой крышкой в небольшом количестве воды.

Содержимое перемешивают на магнитной мешалке при плотно закрытой крышке бюкса.

Раствор после полного растворения йода переносят в мерную колбу с притертой крышкой вместимостью 200 см³ и объем доводят дистиллированной водой до метки.

Основной раствор йода хранят в течение 1 мес. в склянке из темного стекла с притертой пробкой.

4. Приготовление рабочего раствора йода.

2 см³ основного раствора йода разводят раствором соляной кислоты концентрацией 0,5 моль/дм³ при анализе препаратов бактериального происхождения с предполагаемой активностью больше 50 ед/см³ в мерной колбе вместимостью 100 см³. Перед употреблением рабочего раствора проверяют его оптическую плотность в диапазоне длин волн 440 нм в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.

Оптическая плотность рабочего раствора йода должна быть равна 0,220 (+ 0,01).

В случае отклонения ее от этого значения добавляют в раствор несколько капель соляной кислоты или основного раствора йода.

5. Приготовление основного раствора из культуральной жидкости бактериального происхождения.

В мерную колбу вместимостью 100 см³ наливают 90 см³ дистиллированной воды и вносят 1 см³ испытуемой культуральной жидкости. Объем доводят до метки дистиллированной водой.

6. Приготовление рабочего раствора из культуральной жидкости.

Рабочий раствор готовят из основного раствора, разбавляя его дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 100 см³ в соответствии с таблицей.

Таблица

Примечание. При анализе культур бактериального происхождения с предполагаемой активностью

50-150 ед/см³ берут разведение фермента, обеспечивающее гидролиз крахмала от 0,02 до 0,04 г.