Обнаружение карбоксигемоглобина

Химический метод основан на том, что оксид углерода(II) образует с гемоглобином довольно прочное хим. соед-е, к-е плохо реагирует с другими реакти­вами. Обнаружение хим. методом при отравлениях прово­дят непосредственно в крови с исп-нием различ. реактивов. Для сравнения ис­п-ют кровь животных или доноров (контрольная проба), с к-й проводят те же испытания. Изменение окраски наблюдают путем сравнения контрольного и испытуемого образца после добавления различ. реактивов. Кровь, сод-щая карбоксигемоглобин, от при­бавления хим. реагентов не изменяет или незначительно изменяет окраску. Заключение об обнаружении карбоксигемоглобина в крови дается, если с большин­ством реактивов будут получены указанные в таблице рез-ты. Следует учитывать, что при легкой степени отравления и незначительном сод-нии карбоксигемоглобина возможно получение отриц. рез-та.

Спектроскопический метод исп-ся для обнаружения в крови карбоксигемогло­бина при отравлении оксидом углерода(II). В практике химико-токс. анализа для этих целей исп-ют микроспектроскоп - это спектроскоп, соединенный с окуляром. В основе метода - способность гемоглобина и его производных поглощать световое излучение опред. длины волны. Если луч света проходит ч/з р-р, сод-щий гемоглобин и его производные, в спектре появляются темные полосы поглощения. Разбавленная кровь, не сод-щая карбоксигемоглобина, при наблюдении в спек­троскопе обнаруживает две полосы поглощения. Они располагаются между линиями Фраунгофера Д и Е в желтой и зеленой частях спектра, к-е соответствуют оксигемо-глобину. Если к крови добавить восстановитель (NH₄)₂S, оксигемоглобин восстанавли­вается в гемоглобин. При этом вместо 2 полос поглощения будет наблюдаться одна ши­рокая полоса в той же области спектра. В разбавленной крови, направленной на химико-токс. анализ с подозрением на отравление оксидом углерода(II), также будут наблюдаться две темные полосы поглощения. При добавлении к этой крови (NH₄)₂S восстановления не происходит. Две полосы поглощения не исчезают. Это говорит о высокой хим. стойкости карбоксигемоглобина. Однако м/у этими четко выра­женными полосами часто появл-ся небольш. затемнение за счет того, что несвязанный с оксидом углерода(II) оксигемоглобин восстанавливается до гемоглобина.

Спектрофотометрическое определение карбоксигемоглобина. По своей сущности этот метод можно отнести к дифференциальной фотометрии. В крови людей и животных гемоглобин сод-ся в виде дезоксигемоглобина (Нb) и оксигемоглобина (Нb0₂) - продукта взаим-вия гемоглобина с кислородом. В кро­ви может содержаться также небольшое кол-во метгемоглобина (МtHb). При поступлении в организм оксида углерода(II) происх. образ-е карбокси­гемоглобина за счет оксигемоглобина и дезоксигемоглобина. Метгемоглобин с оксидом углерода(II) не связывается. Все указанные соединения имеют характерные спектры по­глощения в области 450-620 нм. Метод определения карбоксигемоглобина основан на том, что при взаим-вии с восст-лями (дитионатом натрия, сульфидом аммония) все соединения гемогло­бина (MtHb, НЬ0₂) за исключением карбоксигемоглобина (СОНb) восстанавливаются до дезоксигемоглобина. Спектр поглощения дезоксигемоглобина имеет одну полосу поглощения с максимумом при 557 нм. Карбоксигемоглобин не восстанавливается, и его спектр поглощения сохраня­ется.

Методика определения карбоксигемоглобина (ВОЗ, Женева, 1998). Для анализа исследуемую кровь делят на 3 части. Одну часть (А) остав­ляют без изменения, вторую часть (В) насыщают оксидом углерода до 100% содержа­ния СОНb и исп-ют в кач-ве стандарта, третью часть (С) насыщают кислородом до полного вытеснения СО, т.е. получают 100% оксигемоглобина.К каждой из трех проб добавляют восстановитель дитионат натрия - NajSjCy 2Н₂0. Регистрируют спектры поглощения всех трех растворов в области 500-620 нм и измеря­ют значение оптической плотности А при 540 и 579 нм (изобестическая точка). Расчет содержания карбоксигемоглобина ведут по величине отношения оптической плотности А₅₄₀/А₅₇₉. Находят отношение А₅₄₀/А₅₇₉ для растворов А, В и С. Эти отношения подставляют в формулу. Этот метод эффективен при исследовании крови, содержащей более 10% карбоксиге­моглобина. Физиологическая норма содержания карбоксигемоглобина в крови составляет от 1,5 до 3,1%, для курильщиков - <10%. Смертельная концентрация карбоксигемогло­бина в крови составляет в среднем -60% и может колебаться в зависимости от внешних условий и особенностей организма от 40 до 80%.