Методы газожидкостной хроматографии в количественном определении летучих ядов. Определение методом внутреннего стандарта.

Количеств. определение летуч. ядов с пом. ГЖХ. Для расчетов колич. определения токсических в-в в извлечениях из био. объектов исп-ют метод абсолютной градуировки и метод внутреннего стандарта.

Метод абсолютной градуировки основан на предварительном определении зависи­мости м/у кол-вом введенного в-ва и площадью или высотой пика на хро­матограмме. В хроматограф вводят известное кол-во градуировочной смеси, опреде­ляют площади или высоты полученных пиков и строят график завис-сти площади или высоты пика от кол-ва введенного в-ва. Затем анал-ют исследуемый образец, измеряют площадь или высоту пика определяемого комп-нта и по градуировочному графику рассчитывают его кол-во.

Метод внутреннего стандарта основан на сравнении пика (по высоте или пло­щади) анализируемого в-ва с высотой или площадью пика образца известной кон­ц-ции. Площадь пика на хроматограмме устанавливают с пом. планиметра или умножением высоты пика на его полуширину. Для целей химико-токсиколог. анализа чаще всего исп-ют метод вну­тр. стандарта. Это позволяет избежать многих ошибок, т. к. исследуемое в-во и внутренний стандарт хроматографируются в абсолютно одинаковых условиях. В качестве внутр. стандарта исп-ют при колич. определении «ле­тучих» ядов пропиловый или изопропиловый спирт.

Количественное определение алифатических спиртов (C₁-C₅) с помощью ГЖХ. Во флакон вмест-стью до 10 мл, сод-щий 0,5 мл 50% р-ра трихлоруксусной к-ты, вносят 0,5 мл р-ра изопропил. спирта с конц-цией 4%о (внутрен­ний стандарт) и 0,5 мл исследуемой пробы (крови или мочи). Флакон закрывают ре­зин. пробкой, к-ю фиксируют. Содержимое флакона перемешивают и шприцем вводят 0,35 мл 30% р-ра нитрита натрия, встряхивают и оставляют на 1 мин. Затем отбирают 0,5 мл парогазовой фазы и вводят в прибор. По полученной хроматограмме из­меряют высоту (площадь) пиков «стандарта» и определяемых в-в. Для расчета конц-ции спирта и др. «летучих» ядов в исследуемой пробе ис­п-ют калибровочный график завис-сти конц-ции и соотношения высот (площа­дей) пика этанола («летучего» яда) к пику изопропанола (или пропанола). Калибровочный график строят ежедневно по 3-4 конц-циям анализируемого яд. в-ва. Удобнее пользоваться вел-ной f_R - фактора чувств-сти или калибровочного коэфф-та, к-й явл-ся постоянным для данной пары в-в на каждой ко­лонке и зависит от летучести определяемых в-в в условиях опыта. Калибровочный коэфф-т рассч-ся по формуле:

где С_г/л – конц-ция спирта («летуч.» яда),%; h_{вн ст} - высота пика внутр. стандарта пропанола или изопропанола; h_x - высота пика определяемого спирта («ле­т.» яда); n - число измерений (обычно не менее 3х).

Калибровочный коэффициент вводят в формулу расчета конц-ции спирта («ле­т.» яда) в исследуемой пробе.

где С_х - концентрация спирта («летучего» яда) в пробе, °/<ю; h_x - высота пика определяе­мого спирта («летучего» яда); А_{вн ст} - высота пика внутреннего стандарта; В - коэф­фициент пересчета водных растворов, на которых проводилось определение f_R, на ис­следуемый объект; для крови Р=0,95, для мочи 0=1,05.