Количественное определение.

При газожидкостной хроматографии исп-ют электронозахватный детектор (ДЭЗ). Опред-ние с пом. детекторов такого типа основано на измерении элек­тропроводности м/у двумя электродами. В ДЭЗ ионы образ-ся под возд-вием радиоактивного излучения. Его источником могут быть ³Н, ⁶³Ni, ⁹⁰Sr и др. Детектор состо­ит из ионизационной камеры с источником радиоакт. излучения и блока питания (2 электрода с определенной разницей потенциалов). Когда в детектор поступает соед-ние, способное захватывать электроны, происходит изменение электропроводности м/у электродами. Св-вом захватывать электроны обладают мол-лы хим. соед-ний, в состав к-х входят атомы галогенов, фосфора, серы, азота, кислорода. Обнаружение хлорсод-щих пестицидов проводят по времени удерживания, а количе­ст. опред-ние - по высоте или площади пика. Фотоколориметрический метод. Он исп-ся чаще всего для определения ГХЦГ в крови и моче. Метод основан на дехлорировании ГХЦГ до бензола или хлорбензола, переведении их в нитропроизводные и получении окрашенных соед-ний с гидроксидом калия в присутствии ацетона. Дехлорирование ГХЦГ в остатке после испарения эфира проводят с помощью цинковой пыли в присутствии 2 мл ледяной уксусной к-ты.

К полученному раствору добавляют 1 мл нитрующей смеси (10% раствор нитрата аммония в концентрированной серной кислоте) и нагревают в течение часа на асбестовой сетке. После охлаждения смесь экстрагируют эфиром, эфир испаряют и к сухому остатку добавляют ацетон и 1 мл 40% раствора гидроксида натрия. Через 20 мин измеряют оптическую плотность окрашенного в фиолетовый цвет рас­твора с помощью фотоколориметра в кювете с толщиной поглощающего слоя 20 мм с зеленым светофильтром.

Определение ГХЦГ аргентометрическим методом.

ГЕПТАХЛОР.

Объектами исследования являются кровь, моча, при смертельном отравлении - же­лудок с содержимым, печень.Для изолирования гептахлора лучшими экстрагентами являются диэтиловый эфир, бензол, гексан.

Изолирование.

Извлечение гептахлора из цельной крови проводят 3 раза по 10 мл, из 20 мл мочи 3 раза по 20 мл экстрагента. Для изолирования из паренхиматозных органов 100 г объ­екта настаивают трехкратно в течение 30 мин с диэтиловым эфиром или гексаном по 100, 50 и 50 мл. Вытяжки в каждом случае объединяют, обрабатывают безводным сульфатом натрия или взбалтывают с насыщенным раствором сульфата натрия в 20% растворе сер­ной кислоты с целью очистки, упаривают до минимального объема и далее используют для качественного и количественного определения.

Обнаружение.

Реакция гептахлора с диэтиламином. Часть извлечения выпаривают досуха. Остаток растворяют в дихлорэтане, затем по стенке пробирки добавляют 5-7 капель смеси диэтиламина и 0,1 М раствора гидроксида калия в метаноле (1:2). Смесь взбалты­вают - появляется зеленая, быстро исчезающая окраска.

Реакция с диэтаноламином проводится, как и предыдущая. В качестве реактива используется смесь диэтаноламина и 0,1 М раствора гидроксида калия в метаноле (1:2). При наличии гептахлора появляется фиолетовое окрашивание.

Реакция с анилином и пиридином. Часть извлечения испаряют досуха, остаток рас­творяют в бензоле, добавляют 5 капель анилина и 2 капли 0,1 М раствора гидроксида калия в метаноле. Смесь нагревают на водяной бане 15 с и прибавляют 1 мл пиридина и снова помещают в водяную баню на 10 с. Смесь перемешивают. Через 1-3 мин появля­ется темно-зеленое окрашивание.

Реакция с раствором гидроксида калия. К части извлечения прибавляют 1 мл 0,1 М раствора гидроксида калия в метаноле и взбалтывают. Пробирку помещают на 30 с в водяную баню, затем прибавляют 1 мл бензола. Постепенно развивается розовое или пурпурное окрашивание.

Количественное определение. Для количественного определения используют метод ГЖХ с электронно-захватным детектором. Определение ведут по высоте или площади пика в присутствии внутреннего стандарта.

ЭФИРЫ КАРБАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ.

Севин применяется как высокоэффективный инсектицид широкого спектра действия для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур и деревьев. Токсическое действие севина выражено слабо. Он обладает умеренной токсичностью и медленно накапливается в организме. В основе токсического действия лежит торможе­ние активности холинэстеразы, нарушение синтеза биогенных аминов.

Изолирование севина и его основного метаболита 1 -нафтола проводится бензо­лом. Навеску биоматериала массой 100 г заливают 100 мл бензола, периодически поме­шивают в течение часа. Затем бензол сливают и экстрагирование повторяют еще дважды (по 100 мл). Бензольные вытяжки объединяют, фильтруют и отгоняют бензол на водяной бане до небольшого объема. Остаток выпаривают под вытяжным шкафом при комнат­ной температуре досуха. Полученный остаток растворяют в 10 мл спирта. При полу­чении окрашенного в желто-бурый цвет остатка его подвергают очистке. С этой целью к сухому остатку добавляют смесь из 20% раствора аммиака, шнцентрированной фос­форной кислоты и ацетона 3:2:5. Для удаления ацетона жидкость нагревают на водяной бане при 40°С Затем охлажденный раствор экстрагируют трижды 20 мл хлороформа. Хлороформные вытяжки объединяют, выпаривают на водяной бане досуха, остаток рас­творяют в 5 мл этилового спирта. В полученном растворе будут находиться севин и 1-на­фтол.

Обнаружение севина. Севин гидролизуют до 1-нафтола и проводят реакции с 4-аминофеназоном, хлоридом меди и бромидом калия, с хлоридом железа(Ш), с нитри-

том натрия. Для обнаружения севина используют также хроматографию в тонком слое сорбента и микрокристаллоскопические реакции.

Реакция с 4-аминофеназоном. В пробирку вносят 1 мл спиртового раствора, полу­ченного после изолирования, и 0,5 мл аммиачной буферной смеси (растворяют 10 г хло­рида аммония в 50 мл 25% раствора аммиака). Пробирку нагревают на водяной бане при температуре 55-60°С (с воздушным холодильником) в течение 15 мин. После охлаждения добавляют три капли 0,5% водного раствора 4-аминофеназона и 6 капель 10% водного раствора гексацианоферрата (III) калия - появляется оранжево-красное окрашивание.

Реакция с хлоридом меди и бромидом калия. В пробирку вносят 1 мл спиртового раствора полученного после изолирования, 0,4 мл 0,5 М раствора гидроксида натрия и на­гревают на водяной бане в течение 10 мин при 55°С (с воздушным холодильником). После охлаждения добавляют 0,5 М хлороводородную кислоту до рН=5-6 и 1 мл свежеприготов­ленной смеси, содержащей 0,1 г хлорида меди(П), 4 г бромида натрия и 5,9 мл воды очи­щенной. При нагревании смеси до 60°С раствор окрашивается в красно-фиолетовый цвет. При взбалтывании с хлороформом окрашенное соединение переходит в слой хлороформа.

Реакция с хлоридом железа(Ш). При добавлении к спиртовому раствору капли 1% раствора хлорида железа(Ш) появляется розовое окрашивание.

Реакция с нитритом натрия. При добавлении к спиртовому раствору 0,5% рас­твора нитрита натрия и разбавленной серной кислоты образуется желтое окрашивание, которое переходит в оранжевое при добавлении гидроксида натрия.

Реакция с пикриновой кислотой. На предметное стекло наносят 1 каплю исследуе­мого раствора и испаряют досуха. К остатку добавляют 1 каплю раствора пикриновой кислоты. Через 10-15 мин появляются темно-желтые кристаллы, собранные в пучки. При малом содержании севина кристаллы образуются очень медленно.

Реакция перекристаллизации. Из спиртового раствора севин кристаллизуется при испарении растворителя в виде характерных сростков кристаллов (крестов и дендритов).

Обнаружение севина и 1-нафтола методом ТСХ. На пластинку с закрепленным слоем оксида алюминия наносят каплю спиртового раствора остатка извлечения из объе­кта и - в качестве «стандартов» - растворы севина и 1 -нафтола. Пластинку помещают в систему растворителей хлороформ - бензол - ацетон (7:2:1). После хроматографирова-ния и высушивания пластинки на воздухе ее облучают УФ-лампой. При наличии севина или 1 -нафтола их пятна флуоресцируют. Затем пластинку опрыскивают щелочным рас­твором диазотированной сульфаниловой кислоты. При этом пятна на пластинке приоб­ретают красное окрашивание.

Количественное определение. Для количественного определения севина исполь­зуют фотоколориметрический метод. Он основан на омылении севина до 1-нафтола и получении окрашенного соединения с хлоридом меди и бромидом калия (купробро-

мидом) по описанной в разделе «обнаружение севина» методике. Окрашенный в красно-фиолетовый или сине-фиолетовый цвет слой хлороформа отделяют и в полученном рас­творе регистрируют оптическую плотность с помощью фотоколориметра при 420 нм (синий светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см. Расчет содержания севина в иссле­дуемом объекте ведут по калибровочному графику.